瞬時轉染方法：1.接種細胞：轉染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后5h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定適合檢測時間。更多關于PEI轉染試劑相關產品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！哪家有GMP等級的PEI轉染試劑？PolyplusPEI轉染試劑溶解度

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多關于PEI轉染試劑，歡迎咨詢上海曼博生物！即用型PEI轉染試劑用途哪個品牌的GMP等級的PEI轉染試劑比較好用？

接種細胞：轉染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多PEI相關產品信息，歡迎咨詢上海曼博生物！

特別提醒1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化。哪款PEI轉染試劑的轉染效率高呢？

對大多數細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉染試劑進行優(yōu)化。PEIMAX(MW40,000)為Polysciences公司生產的化合物產品，每批產品出廠前都經過嚴格的檢測,保證每批產品都100%合格、穩(wěn)定且品質高,但由于作為轉染試劑使用過程中有很多實驗室因素(配置方法，PH,水純度,稱量的準度,dnaRNA純度,細胞狀態(tài)，細胞品系…)造成溶解出現問題或者轉染效率出現差異,所以廠家只受理該產品純度，分子量及重量缺失破損等相關投訴，針對極個別客戶溶解問題和轉染效率問題我們能友善解決。PEI轉染試劑的工作原理是什么呢？PolyplusPEI轉染試劑溶解度

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細胞轉染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段，目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內。目前主要有三種主流方法：生物轉染，物理轉染和化學轉染。其中生物轉染主要是利用病毒等微生物作為基因導入載體，以慢病毒、腺病毒和腺相關病毒等常見，其侵染效率可以達到90%以上，但常因安全性等問題，很多實驗室對其敬而遠之。物理轉染主要包括顯微注射、電穿孔和基因，無論哪一種都需要特定的設備，且一分錢一分貨，性能好的價格也都相對較高。更多關于PEI轉染試劑，歡迎咨詢上海曼博生物！PolyplusPEI轉染試劑溶解度