影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的另一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)是gan ran復(fù)數(shù)（MOI）,MOI指的是每個(gè)細(xì)胞gan ran的病毒粒子個(gè)數(shù)，病毒粒子滴度以gan ran單位(IU)/mL 或 TU/mL表示。慢病毒的gan ran能力隨細(xì)胞類型的不同而不同，因此每種不同的細(xì)胞類型需要不同的MOI。MOI值越大，慢病毒gan ran上的可能性也越大，gan ran效率越高，但對(duì)細(xì)胞的毒性也越大。另外細(xì)胞需要的MOI值越大，也說(shuō)明細(xì)胞越難被轉(zhuǎn)導(dǎo)。慢病毒gan ran時(shí)間也相當(dāng)重要，gan ran后換液太早會(huì)導(dǎo)致gan ran效率下降;gan ran后換液太晚，則對(duì)細(xì)胞的損傷太大，效率也不高。一般在gan ran后24h換液，如果慢病毒對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生了明顯的毒性，可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)及時(shí)提前換液。有關(guān)慢病毒導(dǎo)染的臨床實(shí)驗(yàn)。Sirion慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)毒性分析

慢病毒載體是指以人類免疫缺陷病毒-1(HIV-1)來(lái)源的一種病毒載體，慢病毒載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息，是慢病毒載體系統(tǒng)的主要組成部分。攜帶有外源基因的慢病毒載體在慢病毒包裝質(zhì)粒、細(xì)胞系的輔助下，經(jīng)過(guò)病毒包裝成為有g(shù)an ran力的病毒顆粒，通過(guò)gan ran細(xì)胞或huo ti組織，實(shí)現(xiàn)外源基因在細(xì)胞或huo ti組織中表達(dá)。慢病毒載體是一種源于人類免疫缺陷病毒的基因載體，被guang fan用于真核細(xì)胞如造血干細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的基因編輯。隨著對(duì)基因遞送工具長(zhǎng)期深入的研究，慢病毒作為基因載體已然guang fan用于基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)踐當(dāng)中。關(guān)于慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)原理什么可以增加慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的速度？

第三代慢病毒載體系統(tǒng)又增加了兩個(gè)安全特性：一是構(gòu)建了自身失活的慢病毒載體，即刪除了U3區(qū)的3’ LTR，使載體失去HIV-1增強(qiáng)子及啟動(dòng)子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能轉(zhuǎn)錄出RNA；二是去除了tat基因，代之以異源啟動(dòng)子序列，這樣原始的HIV基因組中的9個(gè)基因在慢病毒載體中只保留了3個(gè)（gag、pol和rev） ，因此第三代慢病毒載體系統(tǒng)更加安全。與第三代系統(tǒng)相比，第二代慢病毒系統(tǒng)使用更多的HIV蛋白（在較少的質(zhì)粒上）以產(chǎn)生功能性慢病毒顆粒。第三代包裝系統(tǒng)不表示tat，被認(rèn)為比第二代系統(tǒng)更安全，但可能更難使用，因?yàn)樗鼈冃枰盟膫€(gè)單獨(dú)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染才能產(chǎn)生功能性慢病毒顆粒。慢病毒包裝系統(tǒng)一般都是三質(zhì)粒或四質(zhì)粒包裝系統(tǒng)。

SirionBiotechGmbH公司于2007年在德國(guó)馬丁雷德成立，此后一直致力于改變病毒載體供應(yīng)的模式。Sirion載體被用于基因功能研究、臨床前靶點(diǎn)驗(yàn)證、基因zhi liao和疫苗開(kāi)發(fā)。SirionTechnologies獲得了歐洲和美國(guó)幾項(xiàng)主要臨床試驗(yàn)（PhaseI/II/III）的許可，是歐洲主要的病毒載體技術(shù)商業(yè)供應(yīng)商，在短時(shí)間內(nèi)可提供quan mian的定制病毒載體組合，并提供個(gè)性化項(xiàng)目管理服務(wù)。LentiBOOST是德國(guó)SirionBiotech開(kāi)發(fā)的一種高效、無(wú)細(xì)胞毒性的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑，用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)。它是一種非離子型、非受體依賴性的表面活性劑，通過(guò)降低細(xì)胞膜粘稠度、提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，促進(jìn)慢病毒與細(xì)胞膜的融合，提高慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。哪種試劑可以幫助增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)染？

為了達(dá)到研究目的，在轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中加入轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑也能有效提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。目前根據(jù)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑的作用機(jī)制可分為兩大類:入胞增強(qiáng)子和入胞后增強(qiáng)子。入胞增強(qiáng)子作用于病毒的附著或進(jìn)入過(guò)程，通過(guò)在物理上增加病毒載體顆粒和靶細(xì)胞之間的共定位或降低它們之間的排斥力發(fā)揮作用。而入胞后增強(qiáng)子是在病毒進(jìn)入細(xì)胞后發(fā)揮作用,降低細(xì)胞質(zhì)中運(yùn)輸阻礙,Zui終獲得更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞比例并提高細(xì)胞內(nèi)VCN。基因zhi liao的臨床效果取決于細(xì)胞的高水平轉(zhuǎn)導(dǎo),雖可通過(guò)二次轉(zhuǎn)導(dǎo)或提高gan ran復(fù)數(shù)(multiplicityofinfection,MOI)增加轉(zhuǎn)導(dǎo)率,但延長(zhǎng)體外培養(yǎng)時(shí)間可誘導(dǎo)干細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期而影響其分化增殖能力;提高gan ran復(fù)數(shù)會(huì)提高插入突變風(fēng)險(xiǎn)和增加生產(chǎn)成本。加入轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。T細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)關(guān)鍵要素

慢病毒載體的研究發(fā)展是怎樣的？Sirion慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)毒性分析

di yi代慢病毒載體以Naldini以及Kafri[2]構(gòu)建的三質(zhì)粒系統(tǒng)為dai biao。該載體系統(tǒng)由包裝質(zhì)粒、包膜質(zhì)粒及載體質(zhì)粒3種質(zhì)粒組成。二代慢病毒載體系統(tǒng)是在di yi代基礎(chǔ)上改進(jìn)的，在包裝質(zhì)粒中刪去了HIV的所有附屬基因vif、vpu、vpr和nef，以減少產(chǎn)生RCR的風(fēng)險(xiǎn)。這些附屬基因的去除并不影響病毒的滴度和轉(zhuǎn)染能力，同時(shí)增加了載體的安全性。第三代慢病毒載體系統(tǒng)又增加了兩個(gè)安全特性：一是構(gòu)建了自身失活的慢病毒載體，即刪除了U3區(qū)的3’ LTR，使載體失去HIV-1增強(qiáng)子及啟動(dòng)子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能轉(zhuǎn)錄出RNA；二是去除了tat基因，代之以異源啟動(dòng)子序列，這樣原始的HIV基因組中的9個(gè)基因在慢病毒載體中只保留了3個(gè)（gag、pol和rev） ，因此第三代慢病毒載體系統(tǒng)更加安全。與第三代系統(tǒng)相比，第二代慢病毒系統(tǒng)使用更多的HIV蛋白（在較少的質(zhì)粒上）以產(chǎn)生功能性慢病毒顆粒。Sirion慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)毒性分析

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