產(chǎn)品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品。相比于PEI25K,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙酰化);2.鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應(yīng)用領(lǐng)域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑,適用于基礎(chǔ)學(xué)術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段,以固體粉末形式提供,需用戶自行配置(詳情見使用方法)。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價比更高?福建PEI轉(zhuǎn)染試劑市場報價
PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗。當(dāng)初試驗經(jīng)費很有限,被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,選擇PEI,以至于相當(dāng)長的時間內(nèi),轉(zhuǎn)染試驗都不順利。下面是幾點關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時,一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,順序不可錯,輕微混勻,靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時,一定要換液!換含有FBS的完全培養(yǎng)液!因為PEI對細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,建議把血清濃度適當(dāng)提高。PS:事實證明,PEI是可行的,已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio ,私信回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請“即可申請PEI試用裝!Thermo FisherPEI轉(zhuǎn)染試劑好用么Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣?
化學(xué)轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學(xué)研究中常用的轉(zhuǎn)染方法,主要包括兩類:陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學(xué)分子與帶有負(fù)電荷的核酸通過正負(fù)電荷作用形成穩(wěn)定的復(fù)合物。一方面使復(fù)合體整體帶上正電荷(多數(shù)細(xì)胞膜表面帶有弱的負(fù)電荷,通過電荷作用吸引復(fù)合體到細(xì)胞膜表面);另一方面對線性的核酸進行濃縮,使其體積變小更易穿透細(xì)胞膜。陽離子聚合物類轉(zhuǎn)染試劑可以說是貧窮實驗室的福音了。早在2012年就有研究小組在大名鼎鼎的Nature Protocol上發(fā)表了PEI作為轉(zhuǎn)染試劑的詳細(xì)方法,到現(xiàn)在被越來越多的實驗室采用。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)產(chǎn)品內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司!也歡迎關(guān)注我們的公眾號:Mine-Bio
1.對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細(xì)胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關(guān)注我們的公眾號Mine-bio,回復(fù)“PEI轉(zhuǎn)染試劑”即可領(lǐng)??!用PEI轉(zhuǎn)染時,一般和DNA的比例會是多少?
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。若想咨詢更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)信息,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關(guān)注公眾號Mine-bio回復(fù)“PEI申請”申請試用裝!PEI轉(zhuǎn)染試劑會有毒性嗎?低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑用途
用PEI轉(zhuǎn)染試劑為什么會出現(xiàn)沉淀?福建PEI轉(zhuǎn)染試劑市場報價
注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌、或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關(guān)注我們的公眾號Mine-bio,回復(fù)“PEI轉(zhuǎn)染試劑”即可領(lǐng)??!福建PEI轉(zhuǎn)染試劑市場報價
細(xì)胞分盤:通過胰酶消化收集細(xì)胞,用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞...
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