膠原酶的配制:建議看相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行膠原酶的配制。小編常用的是DMEM進(jìn)行配制,配制好的膠原酶消化液放置在37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱(注意現(xiàn)用現(xiàn)配)。胰酶(酶聯(lián)合法獲取原代細(xì)胞中會(huì)加入胰酶,相關(guān)文章也蠻多的)膠原酶消化時(shí)間:根據(jù)組織特性,消化時(shí)間會(huì)有差異。以小鼠腎細(xì)胞為例,加入膠原酶Ⅰ進(jìn)行消化后,放入37℃培養(yǎng)箱中消化45min~1h左右,期間每1...
查看詳細(xì) >>原代細(xì)胞培養(yǎng):組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,較簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘,若懸液量大,可適當(dāng)延長離心時(shí)間,但速度不能太高,延時(shí)也不能太長,以避免擠壓或機(jī)械損傷細(xì)胞,離心沉淀用無鈣、鎂PBS洗兩次,用培養(yǎng)基洗一次后,調(diào)整適當(dāng)細(xì)胞濃度后再分瓶培養(yǎng),若選用懸液中某些細(xì)胞,常采用離心后的細(xì)胞分層液,因?yàn)?..
查看詳細(xì) >>如何理解細(xì)胞外基質(zhì)影響細(xì)胞的粘附過程:參與細(xì)胞的遷移細(xì)胞外基質(zhì)可以控制細(xì)胞遷移的速度與方向,并為細(xì)胞遷移提供“腳手架”.例如,纖粘連蛋白可促進(jìn)成纖維細(xì)胞及角膜上皮細(xì)胞的遷移;層粘連蛋白可促進(jìn)多種部位細(xì)胞的遷移.細(xì)胞的趨化性與趨觸性遷移皆依賴于細(xì)胞外基質(zhì).這在胚胎發(fā)育及創(chuàng)傷愈合中具有重要意義.細(xì)胞的遷移依賴于細(xì)胞的粘附與細(xì)胞骨架的組裝.細(xì)胞...
查看詳細(xì) >>隨著細(xì)胞治理以及細(xì)胞儲(chǔ)存產(chǎn)業(yè)發(fā)展,細(xì)胞凍存也面臨從科研應(yīng)用走向產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)化。凍存要求發(fā)生改變,因?yàn)閮龃婕?xì)胞要進(jìn)行臨床應(yīng)用,所以凍存液成分由原來血清變?yōu)闊o血清,無動(dòng)物源成分,凍存液中使用的所有原料均應(yīng)符合臨床或藥物需求。隨著細(xì)胞凍存數(shù)量增加,凍存流程簡化也成為必然趨勢(shì),因此無血清非程序降溫凍存液應(yīng)運(yùn)而生。目前針對(duì)細(xì)胞治理領(lǐng)域,推出一款即用型的無...
查看詳細(xì) >>植物RNA快速提取試劑盒:是一種單相RNA快速提取試劑盒,可高效裂解堅(jiān)固的植物細(xì)胞并強(qiáng)烈壓制RNA酶活性。細(xì)胞破碎之后,植物多糖立即被PlantRNAtrip獨(dú)特的成分結(jié)合。離心抽提步驟將RNA與滅活的RNA酶、蛋白、基因組DNA污染分離,并清理植物多糖多酚以及次生代謝產(chǎn)物。在RNA沉淀之前加入PlantRNAAid清理植物多酚,并清理殘...
查看詳細(xì) >>科學(xué)家曾經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室里就成功地讓RNA實(shí)現(xiàn)了自我復(fù)制的功能。不僅如此,還有科學(xué)家構(gòu)建了一種DNA-RNA雜交基因組的大腸桿菌。這個(gè)實(shí)驗(yàn)證明,即使有DNA-RNA的雜交鏈的中間態(tài),生物也不至于會(huì)死亡。所以,RNA較早可能給就是生物的遺傳物質(zhì),只是后來逐步被替代了。當(dāng)然,還有一些次要的原因,比如,我們都知道DNA是在細(xì)胞核當(dāng)中的,完成生命活動(dòng)這...
查看詳細(xì) >>RNA提取注意事項(xiàng):所有實(shí)驗(yàn)所用的泵頭、離心管等消耗品均要使用RNase-free的;整個(gè)過程要在無RNase污染的條件下進(jìn)行,通??梢栽跓o菌操作臺(tái)中進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并用75%的酒精進(jìn)行擦拭殺菌,如有必要也可在實(shí)驗(yàn)前噴灑一些商用的RNase壓制劑;所有相關(guān)溶液的配制要使用RNase-free水或DEPC水(包括75%酒精也需要用無水乙醇與DEP...
查看詳細(xì) >>酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一、原理簡介。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二、試劑盒特點(diǎn):1、離心吸附...
查看詳細(xì) >>酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一、原理簡介。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二、試劑盒特點(diǎn):1、離心吸附...
查看詳細(xì) >>與DNA不同,RNA一般為單鏈長分子,很多RNA也需要通過堿基配對(duì)原則形成一定的二級(jí)結(jié)構(gòu)乃至三級(jí)結(jié)構(gòu)來行使生物學(xué)功能。RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過程中的橋梁。在此過程中,轉(zhuǎn)運(yùn)RNA是攜帶與三聯(lián)體密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基與正在進(jìn)行翻譯的...
查看詳細(xì) >>植物RNA快速提取試劑盒:1.固體組織破碎設(shè)備??捎孟铝醒b置之一:1)玻璃勻漿器。泡酸清潔,用高壓滅菌蒸餾水洗滌數(shù)次。2)研缽。適用于液氮凍存組織的研磨,清洗方法同玻璃勻漿器。3)高速機(jī)械勻漿器(Polytron,Tekmar或類似產(chǎn)品),打開開關(guān),在蒸餾水中清洗分散器頭數(shù)次。2.高壓蒸汽30分鐘消毒一次性吸頭離心管。RNA沉淀溶解之后,...
查看詳細(xì) >>RNA提取注意事項(xiàng):1、組織樣本要盡可能的新鮮,避免反復(fù)凍融。2、提取時(shí)組織要充分研磨,組織量不宜過少,更不宜過多。3、加入裂解液后應(yīng)給予充分的孵育時(shí)間,使樣本充分裂解。4、在用Trizol法提取時(shí),分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸,不能多吸”,千萬不能提取到中間層,否則會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的基因組DNA污染。5、洗滌時(shí)洗滌液應(yīng)充分浸潤到管壁的四周...
查看詳細(xì) >>