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與傳統(tǒng)的單光子寬視野熒光顯微鏡相比，多光子顯微鏡（MPM）具有光學切片和深層成像等功能，這兩個優(yōu)勢極大地促進了研究者們對于完整在體大腦深處神經(jīng)的了解與認識。2019年，JeromeLecoq等人從大腦深處的神經(jīng)元成像、大量神經(jīng)元成像、高速神經(jīng)元成像這三個方面論述了相關的MPM技術。想要將神經(jīng)元活動與復雜行為聯(lián)系起來，通常需要對大腦皮質深層的神經(jīng)元進行成像，這就要求MPM具有深層成像的能力。激發(fā)和發(fā)射光會被生物組織高度散射和吸收是限制MPM成像深度的主要因素，雖然可以通過增加激光強度來解決散射問題，但這會帶來其他問題，例如燒壞樣品、離焦和近表面熒光激發(fā)。增加MPM成像深度比較好的方法是用更長的波...

CaMPARI，一種能夠兼顧全局和微觀的新型鈣成像技術，包含CaMPARI以及CaMPARI2（第二代）。其原理在于，CaMPARI蛋白在正常狀態(tài)下會發(fā)出綠色熒光，而如果對這種蛋白同時使用高濃度鈣離子與紫外光處理，它就會不可逆、長久地轉變成另一種能發(fā)出紅色熒光的構象，即實現(xiàn)將瞬間的神經(jīng)元活動變成長久的紅色熒光蛋白表達。研究人員通過轉基因技術將這種新型蛋白導入到實驗動物的神經(jīng)系統(tǒng)中，然后用度的紫外光照射動物的大腦，通過檢查熒光，找到發(fā)紅色熒光的神經(jīng)元，這些神經(jīng)元即是在紫外光照射期間活躍的神經(jīng)元。由于紫外光可以對著整個大腦進行照射，所以理論上，人們可以對全腦進行檢查。鈣是模型動物神經(jīng)細胞內重要的第...

nVista神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)是可以在自由活動的動物上進行大范圍的動態(tài)熒光成像的設備。通過nVist，您可以視覺化細胞活動，同步行為學，以及長期追蹤神經(jīng)環(huán)路的活動。nVista被應用于全球的研究機構中，產(chǎn)生了影響力的大數(shù)據(jù)庫。主要特征：利用GCamp鈣離子探針進行成像功能完整的數(shù)據(jù)采集軟件，實現(xiàn)對焦，調焦，行為同步化單細胞分辨率下，可同時捕獲成百上千神經(jīng)元活動長時間追蹤細胞，追蹤時間可長達數(shù)月電子對焦，保證視野范圍的恒定自由動物行為學：可運用標準行為學測量方法，行為操作箱，迷宮，曠場等可進行皮層，深部核團，以及腦干，中腦等區(qū)域的成像記錄動物無需進行適應性訓練鈣離子成像+自由活動行為學1.錨定...

想要對鈣離子的動態(tài)變化進行有效的檢測，鈣離子指示劑的選擇顯得尤為重要。鈣離子熒光指示劑在未結合鈣離子前幾乎無熒光，與鈣離子結合后，熒光強度xianzhu增強。利用這一原理，可以通過指示劑的信號強弱來觀察細胞內鈣離子濃度水平的變化。根據(jù)激發(fā)光波長范圍，鈣離子指示劑可以分為可見光激發(fā)和紫外光激發(fā)，而根據(jù)其工作原理又可以分為比率和非比率型。常見的鈣離子指示劑有以下幾種：紫外光激發(fā)Ca2+熒光探針、可見光激發(fā)Ca2+熒光探針、轉基因Ca2+指示劑?，F(xiàn)在鈣成像技術使用的鈣離子指示劑主要有化學性鈣離子指示劑和基因編碼鈣離子指示劑。上海超微顯微鈣成像價位靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細胞內鈣離子濃度約為50-100...

大家都知道，只有游離鈣才具有生物學活性，而細胞質內鈣離子濃度由鈣離子的內外流平衡所決定，同時也受鈣結合蛋白的影響。細胞外鈣離子內流的方式有很多種，其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體、煙堿型膽堿能受體（nAChR）和瞬時受體電位C型通道（TRPC）等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現(xiàn)出來，以反映神經(jīng)元活性。該方法可以同時觀察多個功能或位置相關的腦細胞。鈣信號在大腦皮層中更能反映神經(jīng)元的活性,因此神經(jīng)元鈣信號的檢測對研究大腦皮層功能至關重要。深圳超微顯微鈣成像供應商Anderson研究團隊發(fā)現(xiàn)實驗室雄性小鼠對雌性和雄性的攀...

研究顯示NL189BLA神經(jīng)元通過投射到CEA來控制探索行為中動物的運動速度和瞬時停滯。隨著進一步的探索，該神經(jīng)元群體的活性以經(jīng)驗依賴性的方式增加，而NL189BLA神經(jīng)元的暫時性功能喪失會導致瞬間停滯的yizhi，而且這些行為停滯與焦慮和恐懼無關。動物在這些停滯點開始和終止探索性旅程并在停滯后會改變頭部朝向和運動軌跡方向，因此在熟悉的位置進行短暫停滯可能是替代性嘗試錯誤行為的決策。這些結果揭示杏仁核作為新穎性/熟悉性檢測器以及行為效應器環(huán)路的共同作用，其具有基于探索行為期間的空間經(jīng)驗來驅動或yizhi自發(fā)運動的能力，這對于動物在自然界中安全有效的探索未知環(huán)境是十分必要的。進行鈣測定必須借助外...

指示劑是如何負載細胞，目前有三種在神經(jīng)元上填充鈣離子指示劑的方法，且都可以用于體內和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個神經(jīng)元中。此方法方便實驗者控制單個神經(jīng)元內的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負載神經(jīng)元，觀察對象為一群神經(jīng)元。盡管此方法可能導致一些膠質細胞也被指示劑所標記，但明顯提高了整體神經(jīng)元的標記百分比，使研究者得以觀察到一群神經(jīng)元內動作電位相關性的活動。第三種也較為常用，通過病毒轉染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑。小鼠頭戴式微型顯微鏡為后續(xù)清醒動物腦功能鈣成像研究提供了一套可靠的顯微成像系統(tǒng)。北京動物...

多種鈣離子指示劑和鈣成像手段的存在使研究人員能夠根據(jù)具體的實驗需要進行選擇。同樣，選擇合適的檢測設備也是至關重要的。對于使用CCD/sCMOS相機的成像系統(tǒng)來說，有兩個要求是很基本的：采集速度：根據(jù)不同的應用所需的相機幀速也不同，對于神經(jīng)細胞來說，一般要求相機速度至少在10fps以上，有些高速應用場景可能需要幾百甚至上千Hz的幀速。靈敏度：為了盡可能降低光漂白和其他副作用（特別是藍光激發(fā)時），需要降低激發(fā)光強度。因此相機要在較寬的發(fā)射光波長范圍上具有高靈敏度，才能檢測到弱光條件下的信號，并適應不同的染料的光譜發(fā)射特性。用標準行為測定法進行成像和行為實驗的時間同步可進行深部腦區(qū)鈣成像。浙江ins...

Anderson研究團隊發(fā)現(xiàn)實驗室雄性小鼠對雌性和雄性的攀爬行為可以通過是否存在超聲發(fā)聲（USV）來區(qū)分。這些和更多的行為數(shù)據(jù)表明，大多數(shù)雄性主導的攀爬是攻擊性的，盡管在極少數(shù)情況下可能是性行為。研究人員調查了USV+和USV-攀爬是否使用相同或不同的下丘腦神經(jīng)基質。通過使用Inscopix自由行為顯微鈣成像方法觀察內側視前區(qū)（MPOA）或腹內側下丘腦腹側細分（VMHvl）中雌jisu受體1(ESR1)陽性神經(jīng)元，發(fā)現(xiàn)在小鼠活動中可以解碼出在USV+和USV-攀爬過程中神經(jīng)元活動的獨特模式。交叉光遺傳刺激表達ESR1和囊狀GABA轉運蛋白（VGAT）的MPOA神經(jīng)元，可促進USV+攀爬，并將雄...

神經(jīng)元鈣成像技術離不開鈣離子指示劑的應用，不同類型的指示劑各有其獨特的功能。那么這些指示劑是如何負載細胞的呢？目前有三種在神經(jīng)元上填充鈣離子指示劑的方法，且都可以用于體內和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個神經(jīng)元中。此方法方便實驗者控制單個神經(jīng)元內的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負載神經(jīng)元，觀察對象為一群神經(jīng)元。盡管此方法可能導致一些膠質細胞也被指示劑所標記，但提高了整體神經(jīng)元的標記百分比，使研究者得以觀察到一群神經(jīng)元內動作電位相關性的活動。第三種也較為常用，通過病毒轉染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑。鈣成...

對于成像和長時間成像，較重要的是要保證細胞的正常生長。熒光團受激發(fā)光光照后產(chǎn)生的氧化物質與蛋白質、核酸和脂肪等發(fā)生反應，熒光信號降低的同時（光致退色）也降低了細胞壽命（光線損傷）。在光照過程中氧化劑的產(chǎn)生,主要決定于熒光團的光化學性質和光照劑量,因此減少光照劑量成為解決上述問題的途徑之一。光漂白（Photobleaching）指在光的照射下熒光物質所激發(fā)出來的熒光強度隨著時間推移逐步減弱乃至消失的現(xiàn)象。熒光成像的質量很大程度上依賴于熒光信號強度，提高激發(fā)光強度固然可以提高信號強度，但激發(fā)光的強度不是可以無限提高的，當激發(fā)光的強度超過一定限度時，光吸收就趨于飽和，并不可逆地破壞激發(fā)態(tài)分子，這就是...

麻省理工學院和波士頓大學的研究人員近研究使用一種熒光探針，能夠在大腦細胞處于電活動狀態(tài)時點亮，可以立即對小鼠大腦中多個神經(jīng)元的活動進行成像。麻省理工學院的腦科學和認知科學神經(jīng)技術教授、兼生物工程學教授EdwardBoyden表示，只需要使用簡單的光學顯微鏡，即可實現(xiàn)這項技術。神經(jīng)科學家可以將大腦內電路的活動進行可視化，并將其與特定行為聯(lián)系起來?！叭绻胙芯恳环N行為或疾病，就需要對神經(jīng)元群體的活動進行成像，讓這些神經(jīng)元群網(wǎng)絡中協(xié)同工作?！盉oyden說。神經(jīng)方面科學迫切需要一種能夠兼顧全局和微觀的新型鈣成像技術。北京神經(jīng)細胞鈣成像生產(chǎn)廠家靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細胞內鈣離子濃度約為50-100nM...

靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細胞內鈣離子濃度約為50-100nM，而細胞興奮時鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍，增加的鈣離子對于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質的過程必不可少。眾所周知，只有游離鈣才具有生物學活性，而細胞質內鈣離子濃度由鈣離子的內外流平衡所決定，同時也受鈣結合蛋白的影響。細胞外鈣離子內流的方式有很多種，其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體、煙堿型膽堿能受體（nAChR）和瞬時受體電位C型通道（TRPC）等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現(xiàn)出來，以反映神經(jīng)元活性。該方法可以同時觀察多個功能或位置相關的腦細胞。鈣信號在大...

鈣離子成像技術（Calciumimaging）是指利用鈣離子指示劑監(jiān)測組織內鈣離子濃度的方法，常用于神經(jīng)系統(tǒng)的研究，指示神經(jīng)元內鈣離子的變化，提示神經(jīng)元活動。其原理在于借助鈣離子濃度與神經(jīng)元活動之間的嚴格對應關系，利用特殊的熒光染料或者蛋白質熒光探針（鈣離子指示劑，Calciumindicator），將神經(jīng)元中鈣離子的濃度通過熒光強度表現(xiàn)出來，并被顯微鏡捕捉，從而達到監(jiān)測神經(jīng)元活動的目的。鈣離子在神經(jīng)元功能中起著重要的作用：它們作為細胞內的信號可觸發(fā)響應，如改變基因表達和突觸囊泡中神經(jīng)遞質的釋放。由于細胞內有離子泵在各種信號刺激下選擇性地運輸這些離子，胞內鈣濃度是高度動態(tài)的。鈣成像利用鈣離子流...

細胞內鈣離子作為重要的信號分子其作用具有時間性和空間性。當個細胞興奮時，產(chǎn)生了一個電沖動，此時，細胞外的鈣離子流入該細胞內，促使該細胞分泌神經(jīng)遞質，神經(jīng)遞質與相鄰的下一級神經(jīng)細胞膜上的蛋白分子結合，促使這一級神經(jīng)細胞產(chǎn)生新的電沖動。以此類推，神經(jīng)信號便一級一級地傳遞下去，從而構成復雜的信號體系，較終形成學習、記憶等大腦的高級功能。在哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)中，鈣離子同樣扮演著重要的信號分子的角色。靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細胞內鈣離子濃度約為50-100nM，而細胞興奮時鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍，增加的鈣離子對于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質的過程必不可少。眾所周知，只有游離鈣才具有生物學活性，而細胞...

Anderson研究團隊發(fā)現(xiàn)實驗室雄性小鼠對雌性和雄性的攀爬行為可以通過是否存在超聲發(fā)聲（USV）來區(qū)分。這些和更多的行為數(shù)據(jù)表明，大多數(shù)雄性主導的攀爬是攻擊性的，盡管在極少數(shù)情況下可能是性行為。研究人員調查了USV+和USV-攀爬是否使用相同或不同的下丘腦神經(jīng)基質。通過使用Inscopix自由行為顯微鈣成像方法觀察內側視前區(qū)（MPOA）或腹內側下丘腦腹側細分（VMHvl）中雌jisu受體1(ESR1)陽性神經(jīng)元，發(fā)現(xiàn)在小鼠活動中可以解碼出在USV+和USV-攀爬過程中神經(jīng)元活動的獨特模式。交叉光遺傳刺激表達ESR1和囊狀GABA轉運蛋白（VGAT）的MPOA神經(jīng)元，可促進USV+攀爬，并將雄...

鈣成像技術是一種監(jiān)測組織內鈣離子濃度的方法，通過使用鈣離子指示劑，科學家可以觀察神經(jīng)信號在神經(jīng)網(wǎng)絡中的傳遞過程，并了解神經(jīng)元活動與內部鈣離子濃度的關系。在靜息狀態(tài)下，大部分神經(jīng)元的胞內鈣離子濃度為50-100nM，而當神經(jīng)元活動的時候，胞內鈣離子濃度能上升10-100倍，增加的鈣離子對于含有神經(jīng)遞質的突觸囊泡的胞吐釋放過程必不可少。鈣成像是一種生物醫(yī)學技術，主要用于觀察和記錄細胞內鈣離子濃度的變化。鈣離子是細胞內重要的信號分子，其濃度的改變可以影響細胞的生理功能和病理狀態(tài)。因此，鈣成像技術對于研究細胞生物學、神經(jīng)科學、心血管醫(yī)學等領域具有重要意義。通過鈣成像技術發(fā)現(xiàn)當神經(jīng)元活動的時候，胞內鈣離...

對新環(huán)境的探索確保了生存和進化的適應性，這是通過根據(jù)經(jīng)驗動態(tài)變化的探索性回合和逮捕來表達的。因此，調節(jié)探索性行為的神經(jīng)環(huán)路應該參與經(jīng)驗的整合，并利用它來選擇適當?shù)男袨檩敵觥Ｍㄟ^空間探索分析，研究人員發(fā)現(xiàn)在之前動物被逮捕的地點，瞬間逮捕數(shù)隨著經(jīng)驗的增加而增加。在自由探索的小鼠身上進行的Inscopix鈣成像顯示，基底外側杏仁核中有一個遺傳和投射定義的神經(jīng)元群，在自我控制的行為停止期間是活躍的。這個合集是以經(jīng)驗依賴的方式響應的，對這些神經(jīng)元的nVoke閉環(huán)光遺傳操作表明，它們在探索過程中驅動經(jīng)驗依賴的逮捕是充分和必要的。投影特異性成像和光遺傳學實驗顯示，這些yizhi是由投射到**杏仁核的基底外側...

細胞內鈣離子作為重要的信號分子其作用具有時間性和空間性。當di1個細胞興奮時，產(chǎn)生了一個電沖動，此時，細胞外的鈣離子流入該細胞內，促使該細胞分泌神經(jīng)遞質，神經(jīng)遞質與相鄰的下一級神經(jīng)細胞膜上的蛋白分子結合，促使這一級神經(jīng)細胞產(chǎn)生新的電沖動。以此類推，神經(jīng)信號便一級一級地傳遞下去，從而構成復雜的信號體系，*終形成學習、記憶等大腦的高級功能。在哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)中，鈣離子同樣扮演著重要的信號分子的角色。靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細胞內鈣離子濃度約為50-100nM，而細胞興奮時鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍，增加的鈣離子對于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質的過程必不可少。眾所周知，只有游離鈣才具有生物學活性，...

使用MPM對神經(jīng)元進行鈣成像時，通過隨機訪問掃描—即激光束在整個視場上的任意選定點上進行快速掃描—可以只掃描感興趣的神經(jīng)元，這樣不僅避免掃描到任何未標記的神經(jīng)纖維，還可以優(yōu)化激光束的掃描時間。隨機訪問掃描可以通過聲光偏轉器（AOD）來實現(xiàn)，其原理是將具有一個射頻信號的壓電傳感器粘在合適的晶體上，所產(chǎn)生的聲波引起周期性的折射率光柵，激光束通過光柵時發(fā)生衍射。通過射頻電信號調控聲波的強度和頻率從而可以改變衍射光的強度和方向，這樣使用1個AOD就可以實現(xiàn)一維橫向的任意點掃描，利用1對AOD，結合其他軸向掃描技術可實現(xiàn)3D的隨機訪問掃描。但是該技術對樣本的運動很敏感，易出現(xiàn)運動偽影。目前，快速光柵掃描...

單光子顯微技術是較成熟的熒光顯微技術，但由于其使用的激發(fā)光波長較短，成像深度有限；能量較大,會造成對熒光物質的漂白,光毒性嚴重。激光共焦掃描顯微鏡由于共焦顯微鏡的孔徑很小,實現(xiàn)樣本三維成像要逐點掃描,成像速度慢,對樣本損害大,很難用于長時間活細胞成像。而寬場顯微鏡能夠很好地實現(xiàn)實時動態(tài)成像,光漂白小,因而較早應用于活細胞內的實時檢測，但寬場顯微鏡由于離焦信號的干擾,難以實現(xiàn)多維成像。Derrick想重點介紹一下較為常用的觀察設備——雙光子熒光顯微鏡（Two-PhotonLaser-ScanningMicroscopy）。雙光子顯微成像技術是近些年發(fā)展起來的結合了共聚焦激光掃描顯微鏡和雙光子激發(fā)...

鈣成像具有以下幾個優(yōu)勢：1.非侵入性：鈣成像技術可以在活物細胞或組織中進行觀察，無需破壞細胞或組織的完整性，因此是一種非侵入性的技術。2.高時空分辨率：鈣成像技術可以實時觀察細胞內鈣離子的動態(tài)變化，具有較高的時空分辨率?？梢圆蹲降解}離子濃度的瞬時變化，揭示細胞內信號傳導的快速過程。3.多樣性：鈣成像技術可以使用不同的熒光探針或基因工程技術，實現(xiàn)對不同類型的細胞或組織進行鈣成像。可以根據(jù)需要選擇適合的探針或方法，擴展應用范圍。4.可定量分析：通過鈣成像技術可以獲得熒光信號的強度，可以進行定量分析，了解鈣離子濃度的變化程度?？梢酝ㄟ^比較不同條件下的鈣成像結果，研究因素對鈣離子信號的調控作用。5.可...

多種鈣離子指示劑和鈣成像手段的存在使研究人員能夠根據(jù)具體的實驗需要進行選擇。同樣，選擇合適的檢測設備也是至關重要的。對于使用CCD/sCMOS相機的成像系統(tǒng)來說，有兩個要求是很基本的：采集速度：根據(jù)不同的應用所需的相機幀速也不同，對于神經(jīng)細胞來說，一般要求相機速度至少在10fps以上，有些高速應用場景可能需要幾百甚至上千Hz的幀速。靈敏度：為了盡可能降低光漂白和其他副作用（特別是藍光激發(fā)時），需要降低激發(fā)光強度。因此相機要在較寬的發(fā)射光波長范圍上具有高靈敏度，才能檢測到弱光條件下的信號，并適應不同的染料的光譜發(fā)射特性。鈣信號在神經(jīng)元功能調控及信息傳遞方面發(fā)揮著重要作用。哈爾濱超微顯微鈣成像nV...

對于雙光子（2P）鈣成像而言，離焦和近表面熒光激發(fā)是兩個大的深度限制因素，而對于三光子成像這兩個問題大大減小，但是三光子成像由于熒光團的吸收截面比2P要小得多，所以需要更高數(shù)量級的脈沖能量才能獲得與2P激發(fā)的相同強度的熒光信號。功能性三光子顯微鏡比結構性三光子顯微鏡的要求更高，它需要更快速的掃描，以便及時采樣神經(jīng)元活動；需要更高的脈沖能量，以便在每個像素停留時間內收集足夠的信號。復雜的行為通常涉及到大型的大腦神經(jīng)網(wǎng)絡，該網(wǎng)絡既具有局部的連接又具有遠程的連接。要想將神經(jīng)元活動與行為聯(lián)系起來，需要同時監(jiān)控非常龐大且分布guangfan的神經(jīng)元的活動，大腦中的神經(jīng)網(wǎng)絡會在幾十毫秒內處理傳入的刺激，要...

轉基因Ca2+指示劑：轉基因技術和光遺傳技術的飛速發(fā)展，催生了基因編碼的Ca2+指示劑（GECIs）。它們不依賴于熒光染料，可以靶向特定的組織，如神經(jīng)細胞、心肌細胞、T細胞等，并且可以避免熒光指示劑帶來的的許多問題，是監(jiān)測轉基因動物體內鈣離子的一個極好的工具。個基因編碼的鈣離子指示劑Cameleon早在1997年就發(fā)表了。它是利用與鈣離子結合后發(fā)生結構變化，作為供體的CFP和作為受體的YFP之間產(chǎn)生FRET的原理。2000年，GCaMP誕生了。它是增強型綠色熒光蛋白（EGFP）和鈣調蛋白（結合鈣離子）、鈣調蛋白結合肽M13組成的，結合鈣離子后，鈣調素-M13相互作用引起GFP空間結構變化，發(fā)出...

傳統(tǒng)的寬場熒光顯微鏡由于光散射的影響，只能夠對大腦淺層的神經(jīng)元或在離體組織上進行成像，共聚焦顯微鏡由于光損傷較大，一般也只用于離體鈣成像。隨著熒光顯微鏡技術的迅速發(fā)展，在體鈣成像技術得到了蓬勃發(fā)展。雙光子熒光顯微鏡能夠在進行在體成像的時候實現(xiàn)高分辨率和高信噪比。例如，用雙光子顯微鏡對海馬樹突棘的鈣離子信號進行成像，研究神經(jīng)元突觸后長時程降低(Wangetal.,2000)；觀察在體小鼠運動皮層神經(jīng)元在嗅覺選擇任務中刺激相關電位(Komiyamaetal.,2010)等等。不過，這些實驗還是需要對動物進行麻醉和固定，而神經(jīng)科學領域很多研究更希望能夠對自由活動的動物進行研究。近年來出現(xiàn)了通過植入性...

使用MPM對神經(jīng)元進行鈣成像時，通過隨機訪問掃描—即激光束在整個視場上的任意選定點上進行快速掃描—可以只掃描感興趣的神經(jīng)元，這樣不僅避免掃描到任何未標記的神經(jīng)纖維，還可以優(yōu)化激光束的掃描時間。隨機訪問掃描可以通過聲光偏轉器（AOD）來實現(xiàn)，其原理是將具有一個射頻信號的壓電傳感器粘在合適的晶體上，所產(chǎn)生的聲波引起周期性的折射率光柵，激光束通過光柵時發(fā)生衍射。通過射頻電信號調控聲波的強度和頻率從而可以改變衍射光的強度和方向，這樣使用1個AOD就可以實現(xiàn)一維橫向的任意點掃描，利用1對AOD，結合其他軸向掃描技術可實現(xiàn)3D的隨機訪問掃描。但是該技術對樣本的運動很敏感，易出現(xiàn)運動偽影。目前，快速光柵掃描...

霍華德休斯頓醫(yī)學研究所（HHMI）ScottSternson課題組研究了影響這種源源不斷的食欲的神經(jīng)機制。他們通過使用Inscopix小顯微鏡觀察小鼠腦干區(qū)域的神經(jīng)元，發(fā)現(xiàn)貪念美食的小鼠可能是因為特殊的大腦區(qū)域對美食和奶茶比其他小鼠更加敏感。本能會驅使我們在感到饑餓和干渴的時候尋找食物，在找到食物或水時通過眼睛看、鼻子聞、嘴巴嘗等方式來感受和決定要不要吃，吃到一定程度產(chǎn)生滿足感（或是吃了還想吃的不滿足感）。因此，要把大腦中匯集的關于吃喝的各類信號分清楚，并找出控制不同吃喝行為的神經(jīng)環(huán)路無疑是很有挑戰(zhàn)的任務。ScottSternson博士的研究團隊在小鼠大腦中尋找饑餓和干渴神經(jīng)環(huán)路共存的腦區(qū)。他...

紫外光激發(fā)Ca2+熒光探針：Fura-2和Indo-1都是紫外光激發(fā)的雙波長Ca2+熒光指示劑，也是目前較常用的比率型鈣離子熒光探針。與其他代的熒光指示劑相比，它們的熒光信號更強，對Ca2+的選擇性也更強。比率指示劑會在與Ca2+結合后會改變吸收/發(fā)射特性。以雙波長激發(fā)指示劑Fura-2為例。如圖2所示，低Ca2+濃度下，F(xiàn)ura-2在~380nm處激發(fā)，高Ca2+濃度下，在~340nm處激發(fā)。光譜由兩個峰組成：左側較短波長的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而增大，右側較長波長的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而減小。通過340/380nm交替激發(fā)，獲取在510nm處對應的發(fā)射光熒光強度的比率，就可以對C...

鈣成像的熒光指示劑鈣成像的熒光探針一般均為Ca2螯合劑EGTA，APTRA，BAPTA的衍生物，它們可以結合鈣離子從而顯示一個光譜響應，使研究者可以用熒光顯微鏡來觀察細胞內的自由鈣的濃度。熒光顯微鏡可以使用普通的倒置熒光顯微鏡來進行鈣信號的測定和成像。并可結合電生理設備、活細胞培養(yǎng)裝置等，適用于大強度、廣范圍的鈣信號測定。共聚焦顯微系統(tǒng)，共聚焦以激光為光源，且可配備氬離子光源，可以選擇可見光激發(fā)的鈣指示劑，進行層掃，相比普通熒光顯微鏡有更好的空間分辨率。并且共聚焦除了配備大視野掃描鏡更可配置共振掃描振鏡，以滿足更高速成像應用的需求。雙光子顯微系統(tǒng)使用長波長來激發(fā)熒光指示劑，具有較低的細胞毒性，...