輕唾瓊脂培養(yǎng)基(MSA)基礎(chǔ)是一種用于分離培養(yǎng)輕型唾液鏈球菌的選擇性培養(yǎng)基。以下是使用輕唾瓊脂培養(yǎng)基(MSA)進行細(xì)菌分離和鑒定的步驟:1.**制備培養(yǎng)基**:-稱取90gMSA粉末,加入1000mL蒸餾水或去離子水。-加熱煮沸至完全溶解。-121℃高壓滅菌15分鐘。-冷卻至50-55℃,加入1mL無菌1%亞碲酸鉀溶液,混勻后倒入無菌培養(yǎng)皿中。2.**接種樣本**:-將待測樣本如咽拭子、尿液或其他臨床樣本進行適當(dāng)?shù)南♂尅?將稀釋后的樣本均勻地涂布在MSA平板上。3.**培養(yǎng)**:-將接種后的培養(yǎng)皿置于35-37°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-48小時。4.**觀察菌落生長**:-觀察培養(yǎng)基上生長的菌落,注意菌落的顏色、形態(tài)和大小。-腸球菌在MSA上通常形成藍(lán)色-黑色的菌落。5.**挑選可疑菌落**:-挑取可疑的菌落進行純化培養(yǎng)。6.**進行生化試驗**:-對純化后的菌株進行一系列的生化試驗,如糖發(fā)酵試驗、CAMP試驗、膽汁七葉苷試驗等,以進一步鑒定菌種。7.**結(jié)果分析**:-根據(jù)菌落特征和生化試驗結(jié)果,結(jié)合菌株的形態(tài)學(xué)特征,進行菌種的鑒定。8.**報告結(jié)果**:-將鑒定結(jié)果整理成報告,包括菌株的名稱、數(shù)量和相關(guān)的生化特性。某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶,將尿素分解產(chǎn)生氨,使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性,酚紅指示劑在pH升高時變色(通常為粉紅色)。TSB-YE平板
酵母浸粉葡萄糖瓊脂(YPDA)是一種常用的微生物培養(yǎng)基,尤其是在酵母菌的培養(yǎng)中。以下是它的一些主要特點:1.**成分**:YPDA的主要成分包括酵母浸粉、蛋白胨(或胰化胨)、葡萄糖和瓊脂。具體配方為1%酵母浸粉、2%蛋白胨、2%葡萄糖,若制固體培養(yǎng)基,加入2%瓊脂粉。2.**pH值**:YPDA的pH值通常調(diào)節(jié)在6.0±0.2(25℃)。3.**滅菌處理**:制備好的培養(yǎng)基需要進行121℃高壓滅菌15分鐘。葡萄糖溶液滅菌后加入,以避免高溫下可能發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)導(dǎo)致培養(yǎng)基成分變化。4.**用途**:YPDA主要用于酵母菌的培養(yǎng),也用于藥品和生物制品中含王漿和蜂蜜的合劑酵母菌數(shù)測定。5.**配制方法**:首先溶解10g酵母浸粉和20g蛋白胨于900ml水中,如制平板加入20g瓊脂粉,然后進行高壓滅菌。滅菌后加入100ml20g葡萄糖溶液。6.**儲存條件**:液體YPDA培養(yǎng)基可常溫保存;瓊脂YPDA平板在4℃可保存幾個月。7.**微生物生長特征**:不同細(xì)菌在酵母浸粉葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上的生長特征不同,例如酵母菌形成白色凸起光滑菌落,白色念珠菌也形成白色凸起光滑菌落,而黑曲霉菌則有黑色孢子。葡萄糖胰蛋白胨瓊脂預(yù)裝培養(yǎng)皿CVT瓊脂培養(yǎng)基主要用于乳制品中嗜冷菌的計數(shù),也可用于其他樣品中嗜冷菌的分離和計數(shù) 。
牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ)是一種用于分離培養(yǎng)李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的選擇性培養(yǎng)基。它的成分包括特殊蛋白胨、可溶性淀粉、氯化鈉、七葉苷、檸檬酸鐵銨、氯化鋰和瓊脂等,pH值控制在7.0±0.2(25℃)。**特點**:1.**選擇性**:含有氯化鋰和抗生物質(zhì)添加劑(如多粘菌素E、放線菌酮、吖啶黃素、頭孢雙硫唑甲氧、磷霉素),這些成分能夠抑制革蘭氏陰性菌和大多數(shù)革蘭氏陽性菌的生長,特別是非李斯特氏菌。2.**應(yīng)用**:主要用于食品、水和污水樣本中李斯特氏菌的選擇性分離培養(yǎng),符合ISO和SN標(biāo)準(zhǔn)。3.**配制方法**:通常稱取5.85g的OXA基礎(chǔ)粉末,溶解在100mL蒸餾水中,高壓滅菌15分鐘后冷卻至50℃,再加入配套的添加劑,混勻后傾入無菌平皿備用。4.**結(jié)果觀察**:李斯特氏菌在OXA培養(yǎng)基上生長時,會形成黑色菌落,并且菌落周圍可能有黑色環(huán)。牛津瓊脂基礎(chǔ)因其高選擇性和特異性,是檢測食品和水樣本中李斯特氏菌污染的重要工具。
營養(yǎng)瓊脂方瓶(羅氏瓶)通常是指營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的一種包裝形式,適合實驗室進行微生物培養(yǎng)使用。營養(yǎng)瓊脂是一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基,用于非苛養(yǎng)微生物的培養(yǎng),以及在生化或血清學(xué)測試前的質(zhì)量控制和純度檢查。以下是營養(yǎng)瓊脂的典型配方:1.**成分**:-蛋白胨:10.0g/L-牛肉膏粉:3.0g/L-氯化鈉:5.0g/L-瓊脂:15.0g/L-終pH值:7.3±0.2(25℃)2.**配制方法**:-稱取33g營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基粉末,加入1000mL蒸餾水或去離子水。-攪拌加熱煮沸至完全溶解。-分裝到方瓶(羅氏瓶)中,通常分裝量為100mL或500mL。-121℃高壓滅菌15分鐘。3.**使用方法**:-滅菌完成后,取出方瓶并冷卻至大約40-45°C。-如果需要富集,可在滅菌后加入血液或其他生物液體。-在無菌條件下,將培養(yǎng)基倒入無菌的培養(yǎng)皿中或作為液體培養(yǎng)基使用。-培養(yǎng)基凝固后,可將培養(yǎng)皿放置在熱空氣烤箱中,用較低溫度烘烤幾分鐘,以去除使用前培養(yǎng)皿上的任何水分。4.**儲存方法**:-粉末形式的培養(yǎng)基應(yīng)儲存在10至30°C之間,容器需緊密封閉。-制備好的培養(yǎng)基應(yīng)在20-30°C的環(huán)境中儲存。CASO AGAR+20g/L尿素是一種用于巴氏芽孢桿菌的培養(yǎng)基,其成分包括酪蛋白胨、氯化鈉和瓊脂,pH值為7.3 。
Leeming-Notman培養(yǎng)基(LN培養(yǎng)基)是一種用于培養(yǎng)馬拉色菌屬(Malassezia)的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基的配方包含多種營養(yǎng)成分,能夠促進馬拉色菌的生長。以下是Leeming-Notman培養(yǎng)基的一些關(guān)鍵特點和配制方法:1.**配方組成**:-蛋白胨(Bacteriologicalpeptone):10.0g-葡萄糖(Glucose):10.0g-酵母膏粉(Yeastextract):2.0g-牛膽鹽(Oxbile,desiccated):8.0g-單硬脂酸甘油酯(Glycerolmonostearate):0.5g-吐溫60(Tween60):5.0mL-橄欖油(Oliveoil):20mL-瓊脂(Agar):15g-去離子水(Deionizedwater):1.0L-pH值調(diào)整至5.6±0.2(25℃)2.**配制方法**:-稱取培養(yǎng)基粉末,加入到蒸餾水或去離子水中。-加熱煮沸以幫助成分溶解。-調(diào)節(jié)pH值至指定范圍。-進行高壓滅菌,通常是121℃滅菌15分鐘。-冷卻至50-55℃后,無菌加入添加劑。3.**用途**:-主要用于培養(yǎng)馬拉色菌屬的菌,這些菌與人類皮膚有共生關(guān)系,并且在醫(yī)學(xué)研究中具有重要意義。4.**保存條件**:-通常在2-8°C下保存,保質(zhì)期通常為兩年。5.**注意事項**:-避免吸入和皮膚接觸。-配制過程中應(yīng)在無菌條件下操作。
PK瓊脂培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和分離特定的微生物,如腸道桿菌等。它也可用于微生物的鑒定,通過觀察菌落形態(tài)等。TSB-YE平板
DTA培養(yǎng)基(葡萄糖胰蛋白胨瓊脂)是一種用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基,其特點和使用方法如下:1.**用途**:DTA培養(yǎng)基主要用于嗜熱菌芽孢(包括需氧芽孢總數(shù)、平酸芽孢和厭氧芽孢)的分離培養(yǎng)。2.**成分**:該培養(yǎng)基的成分通常包括胰酪蛋白胨、葡萄糖、瓊脂和溴甲酚紫。具體成分比例為胰酪蛋白胨10.0g/L、葡萄糖5.0g/L、瓊脂15.0g/L以及溴甲酚紫0.04g/L。3.**pH值**:pH值控制在6.7±0.1(25℃)。4.**檢驗原理**:胰酪蛋白胨提供碳氮源、維生素和生長因子;葡萄糖作為可發(fā)酵的糖,溴甲酚紫作為酸堿指示劑;瓊脂作為凝固劑。5.**配制方法**:稱取30.0gDTA培養(yǎng)基粉末,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,然后在121℃下高壓滅菌15分鐘,備用。6.**使用方法**:在加熱滅菌前,培養(yǎng)基成分應(yīng)邊攪拌邊溶解于水中。滅菌時間通常要在121℃下保持15~20分鐘,這個時間從中心溫度達(dá)到121℃開始計算。7.**結(jié)果觀察**:嗜熱脂肪芽孢桿菌在DTA培養(yǎng)基上的生長特征為黃色菌落。8.**微生物靈敏度試驗**:按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,接種質(zhì)控菌株,放置于55℃需氧培養(yǎng)48小時,以驗證培養(yǎng)基的性能。TSB-YE平板