培養(yǎng)基是指供給微生物、植物或動(dòng)物(或組織)生長(zhǎng)繁殖的,由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長(zhǎng)時(shí)間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管,均改制成粉末。營(yíng)養(yǎng)成分的含量和比例對(duì)于培養(yǎng)基的功效和成效至關(guān)重要。CCDA添加劑
液體培養(yǎng)基:只含有稀釋的瓊脂而沒(méi)有固體成分的培養(yǎng)基稱作液體培養(yǎng)基,這類培養(yǎng)基可以是透明的,也可以加入某些蛋白質(zhì)、膽汁、奶酪素等物質(zhì)使其呈乳白色。液體培養(yǎng)基的傳遞作用弱,在其內(nèi)部微生物可以自由地游走和移動(dòng)。由于養(yǎng)分的擴(kuò)散和彌散,微生物生長(zhǎng)比較均勻,容易觀察和操作。液體培養(yǎng)基適用于下列技術(shù)和用途:培養(yǎng)非必需氧氣的微生物,便于大規(guī)模分離和培養(yǎng)細(xì)胞,易于獲得菌液。固體培養(yǎng)基:上面介紹的培養(yǎng)基中,添加2-3%瓊脂成為了固體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基結(jié)構(gòu)較堅(jiān)硬,微生物只能在上面生長(zhǎng),分布和傳播相對(duì)固定,因此比較有利于觀察某些微生物的生長(zhǎng),或?qū)Σ煌⑸锖M(jìn)行分離。固體培養(yǎng)基適用于下列技術(shù)和用途:建立單個(gè)菌落,分離微生物混合物,培養(yǎng)土壤樣品等。赫奇遜液體培養(yǎng)基不同種類的液體培養(yǎng)基具有不同的營(yíng)養(yǎng)成分和試劑配方,它們可用于不同類型的細(xì)胞和微生物培養(yǎng)。
如何有效避免培養(yǎng)基污染?做好實(shí)驗(yàn)操作規(guī)則:在實(shí)驗(yàn)中制定好統(tǒng)一意識(shí)的操作規(guī)則至關(guān)重要。例如,制定有關(guān)實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)中洗手、換鞋、穿戴實(shí)驗(yàn)服的規(guī)定。還要保證操作的環(huán)境衛(wèi)生、實(shí)驗(yàn)材料消毒等等。這樣可以降低實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的細(xì)菌來(lái)源,保證實(shí)驗(yàn)材料的純度,同時(shí)也可以提高操作人員的自覺(jué)性和流程規(guī)范性,然后避免因人為原因而產(chǎn)生的污染。做好培養(yǎng)基制作:在培養(yǎng)基的制作過(guò)程中,一些常見(jiàn)的問(wèn)題往往會(huì)導(dǎo)致污染,例如:不干凈的試管,不潔凈的機(jī)器設(shè)備,不正確的過(guò)濾操作和培養(yǎng)基儲(chǔ)存不當(dāng)?shù)?。為了避免這些問(wèn)題,實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)該采用高標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)原料,在制作培養(yǎng)基前徹底清洗操作區(qū),并使用無(wú)菌試管及機(jī)器設(shè)備,千萬(wàn)不要盲目省事不進(jìn)行適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)準(zhǔn)備和操作過(guò)程。
干粉培養(yǎng)基是一種經(jīng)常被使用的培養(yǎng)基,由于其易于儲(chǔ)存和攜帶,也經(jīng)常被用于實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)操作中。在使用干粉培養(yǎng)基時(shí),人們經(jīng)常會(huì)問(wèn)到一個(gè)問(wèn)題,那就是干粉培養(yǎng)基可以重復(fù)使用嗎?首先,需要明確的是干粉培養(yǎng)基是指培養(yǎng)基由干燥制成的粉末,而并不是指培養(yǎng)基的原液。在細(xì)菌或其他微生物培養(yǎng)中,常用的是制成干粉之后需要通過(guò)加水或其他液體來(lái)重建成液態(tài)培養(yǎng)基的干粉培養(yǎng)基。因此,干粉培養(yǎng)基在制備時(shí)需要嚴(yán)格的操作和儲(chǔ)存規(guī)范,以保證其質(zhì)量和可重復(fù)使用性。而對(duì)于是否可以重復(fù)使用,需要依據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體情況來(lái)考慮。如果干粉培養(yǎng)基使用過(guò)程中與周圍環(huán)境接觸,或者在制備時(shí)不符合儲(chǔ)存要求,那么干粉培養(yǎng)基的質(zhì)量就無(wú)法得到保障。這時(shí)候,即便再次使用干粉培養(yǎng)基,也無(wú)法保證其質(zhì)量和培養(yǎng)結(jié)果的可靠性。干粉培養(yǎng)基可以添加不同的生長(zhǎng)因子,這些物質(zhì)有助于促進(jìn)或抑制細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)。
干粉培養(yǎng)基是一種在體積很小的瓶子里包含了原材料、微量元素和保持pH緩沖液的粉末狀態(tài)培養(yǎng)基。因其干燥的特點(diǎn),具有很長(zhǎng)時(shí)間的保存期限,在良好的保存環(huán)境下,可以達(dá)到數(shù)年乃至十年的保存。這使得干粉培養(yǎng)基非常適合涉及多個(gè)實(shí)驗(yàn)、多個(gè)批次的工作。干粉培養(yǎng)基只需要在配制時(shí)加入一定的水,就可以得到所需的液體培養(yǎng)基,降低了配制的難度和操作的復(fù)雜度。這種方法避免了由于不同配制批次需要不同的調(diào)整,從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的上下波動(dòng)的情況。干粉培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)之一是可以自由調(diào)整,根據(jù)需要添加不同的成分,達(dá)到特定實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡男枰@?,添加具有特定作用的?nèi)分泌物質(zhì),如去氧地酸、細(xì)胞因子等,可以促進(jìn)細(xì)胞增殖或發(fā)育。此外,通過(guò)添加一些抑菌物質(zhì),如維生素或其他抑菌劑,可以有效地抑制不需要的微生物污染。培養(yǎng)基根據(jù)功能分為選擇性培養(yǎng)基、區(qū)分性培養(yǎng)基、富集培養(yǎng)基等。酵母氨基酸缺陷型合成液體培養(yǎng)基(色氨酸/尿嘧啶缺陷)
常見(jiàn)的培養(yǎng)基類型包括誘導(dǎo)性培養(yǎng)基、不含某種特定營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基。CCDA添加劑
培養(yǎng)基的pH值對(duì)微生物的生長(zhǎng)和繁殖有著重要的影響,因此有時(shí)候培養(yǎng)基會(huì)按照pH值的范圍進(jìn)行分類。中性培養(yǎng)基的pH值約為7.4,這種培養(yǎng)基適合于大多數(shù)微生物的生長(zhǎng)繁殖,例如生長(zhǎng)基(Nutrient Agar)就是一種中性培養(yǎng)基。酸性培養(yǎng)基的pH值在5.5到6.5之間,適用于某些菌株,如乳酸桿菌、酸性乳桿菌等。堿性培養(yǎng)基的pH值超過(guò)7.0,是為了培養(yǎng)生長(zhǎng)于高pH環(huán)境的微生物,例如氫氧化物耐受乙酸桿菌等。預(yù)裝培養(yǎng)基還可以根據(jù)其使用目的進(jìn)一步分類。細(xì)菌富集培養(yǎng)基:細(xì)菌富集培養(yǎng)基的目的是收集低濃度的微生物,通常在自然樣品中存在非常少量的微生物,因此必須富集到足夠的量,才能進(jìn)行接下來(lái)的試驗(yàn)。這種培養(yǎng)基通常添加有各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),以刺激微生物的生長(zhǎng)。CCDA添加劑
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