在培養(yǎng)基中加入 HEPES 有何好處?培養(yǎng)基中常用的緩沖體系是碳酸氫鹽，它可提供營養(yǎng)，但卻在生理 pH 條件下會降低緩沖能力。而HEPES 是一種很強的緩沖劑，能使細胞培養(yǎng)基在 pH7.2-7.6 條件下緩沖能力增強。HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細胞時培養(yǎng)基脫離了 5%CO2 的環(huán)境，CO2 氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時可以維持 pH7.0 左右。一般在進行克隆化培養(yǎng)時要添加HEPES。神經(jīng)細胞原代培養(yǎng)的過程中能用到。牛肉精蛋白胨培養(yǎng)基是常用的富營養(yǎng)培養(yǎng)基，適用于快速生長的微生物。RNS培養(yǎng)基

培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2-7.4，若pH值超過7.6或遠低于6.8，則大多數(shù)細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體，置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細胞種類、時間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。植物組織培養(yǎng)基 Nielsen 培養(yǎng)基培養(yǎng)基通常由培養(yǎng)基粉末和水混合而成。

近年來，國內(nèi)外利用某些細菌特有的酶，選擇相應(yīng)的作用底物，研制出某些細菌專門用的的顯色培養(yǎng)基，用于細菌的分離鑒別，收到了良好的效果，這種顯色培養(yǎng)基實際上也是鑒別培養(yǎng)基。其基本原理是將色原(或熒光原)與細菌作用底物的結(jié)合物加于培養(yǎng)基中，當(dāng)細菌含有相應(yīng)酶時，使該結(jié)合物分解而顯色(或顯示熒光)。如色原糖苷結(jié)合物在糖苷酶作用下分解，使糖苷與色原分離，并顯示顏色；熒光氨基酸結(jié)合物(不顯熒光)在氨基肽酶作用下，使氨基酸與熒光物質(zhì)分離而顯示熒光。常用顯色的色原有α-萘酚、β-萘酚、鄰位硝基酚、對位硝基酚、對硝基苯胺、酚酞、2-氨基4-硝基苯等；常用的熒光物有4-甲基傘形酮(又稱7-羥基4-甲基香豆素)等。目前，顯色培養(yǎng)基已用于多種細菌的分離鑒別培養(yǎng)，如沙門菌、大腸埃希菌、李斯特菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌、白色念珠菌等顯色培養(yǎng)基。

在培養(yǎng)基中加人某種抑制劑和指示劑，抑制某些細菌生長，促進目的菌的繁殖，并使所生長的細菌菌落具有一定特征，以助鑒別挑選，這類培養(yǎng)基稱為選擇性鑒別培養(yǎng)基。如SS瓊脂，在該培養(yǎng)基配方中含有乳糖(反應(yīng)底物)、中性紅和檸檬酸鐵銨(指示劑)、燦爛綠及膽鹽等(抑菌劑)。燦爛綠和膽鹽等抑菌劑能抑制革蘭氏陽性菌及部分大腸埃希菌的生長，而對沙門菌及志賀菌基本無影響，而且大腸埃希菌能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使菌落變紅色，沙門菌和志賀菌不發(fā)酵乳糖，其菌落為無色。如細菌產(chǎn)生硫化氫，則與檸檬酸鐵銨反應(yīng)生成硫化亞鐵沉淀，菌落中心呈黑色或褐色。以此達到鑒別的目的。培養(yǎng)基是用于微生物、細胞、組織等體外培養(yǎng)的營養(yǎng)精制的物質(zhì)。

還有一些鑒別性培養(yǎng)基，是利用細菌特有的各種酶系統(tǒng)，能分解利用各種特定的糖、醇、氨基酸或其他基質(zhì)而產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)堿或產(chǎn)生其他可見物質(zhì)，依此進行細菌的鑒別，例如常用的生化培養(yǎng)基。用于細菌生化特性試驗的培養(yǎng)基特點是在無糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加人某種特定的基質(zhì)，并加人指示劑，細菌在此類培養(yǎng)基中的一系列生化反應(yīng)結(jié)果，均通過指示劑顯示出來。此類培養(yǎng)基為生化反應(yīng)鑒別培養(yǎng)基。根據(jù)用量又可分為常量生化培養(yǎng)基和微量生化培養(yǎng)基。值得注意的是生化試驗培養(yǎng)基的某些成分受高溫、pH等諸多因素的影響，在配制和使用時，應(yīng)根據(jù)實際情況嚴格掌握，防止有效成分被破壞，以保障其使用效果。培養(yǎng)基是細胞和微生物生長所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。MSM培養(yǎng)基基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基

液體培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于微生物菌株的生長、染色及細胞背景下的細胞培養(yǎng)等方面。RNS培養(yǎng)基

細菌培養(yǎng)基之根瘤菌培養(yǎng)基：葡萄糖10g，磷酸氫二鉀0.5g，碳酸鈣3g，硫酸鎂0.2g，酵母粉0.4瓊脂20g，水1000ml，1%結(jié)晶紫溶液1ml。先把瓊脂加水煮沸溶解，然后分別加入其他組分，攪拌使溶解后，分裝，滅菌，備用。放線菌培養(yǎng)基：（1）淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基（高氏一號培養(yǎng)基）可溶性淀粉2.0g，硝酸鉀0.1g，磷酸氫二鉀0.05g，氯化鈉0.05g，硫酸鎂0.05g，硫酸亞鐵0.001g，瓊脂2g，水100ml。先把淀粉放在燒杯里，用5ml水調(diào)成糊狀后，倒入95ml水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號，加熱到煮沸時加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補足失水。調(diào)整pH值到7.2-7.4，分裝后滅菌，備用。RNS培養(yǎng)基

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