指示劑是如何負(fù)載細(xì)胞，目前有三種在神經(jīng)元上填充鈣離子指示劑的方法，且都可以用于體內(nèi)和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個(gè)神經(jīng)元中。此方法方便實(shí)驗(yàn)者控制單個(gè)神經(jīng)元內(nèi)的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負(fù)載神經(jīng)元，觀察對象為一群神經(jīng)元。盡管此方法可能導(dǎo)致一些膠質(zhì)細(xì)胞也被指示劑所標(biāo)記，但明顯提高了整體神經(jīng)元的標(biāo)記百分比，使研究者得以觀察到一群神經(jīng)元內(nèi)動作電位相關(guān)性的活動。第三種也較為常用，通過病毒轉(zhuǎn)染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑。鈣成像數(shù)據(jù)采集盒擁有 2TB 存儲空間，可選擇以太網(wǎng)或 Wi? 方式連接電腦。重慶神經(jīng)元鈣成像售后保障
雙光子顯微成像技術(shù)是近些年發(fā)展起來的結(jié)合了共聚焦激光掃描顯微鏡和雙光子激發(fā)技術(shù)的一種新型非線性光學(xué)成像方法,采用長波激發(fā)，能對組織進(jìn)行深層次成像。常用的比較好激發(fā)波長大多位于800-900nm，而水、血液和固有組織發(fā)色團(tuán)對這個(gè)波段的光吸收率低，此外散射的激發(fā)光子不能激發(fā)樣品，因此背景第，光損傷小，適用于在體檢測。雙光子熒光成像技術(shù)能準(zhǔn)確定位細(xì)胞內(nèi)置入的微電極位置，從而觀察胞體、樹突甚至單個(gè)樹突棘的活性。研究者可完整的觀察神經(jīng)組織的gaofen辨熒光圖像,甚至可以分辨神經(jīng)細(xì)胞單個(gè)樹突棘中的鈣分布。西安超微顯微鈣成像鈣成像技術(shù)發(fā)現(xiàn)鈣離子產(chǎn)生各種各樣的胞內(nèi)信號。
利用鈣成像技術(shù)記錄大腦活動，隨著功能光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展，神經(jīng)學(xué)家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況。功能鈣成像技術(shù)就是其中之一，其主要原理是將外源性熒光信號和生理現(xiàn)象耦合起來——通過熒光染料信號的改變反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度，以此細(xì)胞的功能狀態(tài)。目前它被廣泛應(yīng)用于實(shí)時(shí)監(jiān)測一群相關(guān)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化，從而判斷其功能活動。該技術(shù)的出現(xiàn)使得科學(xué)家可以親眼目睹神經(jīng)信號在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)之中時(shí)間和空間上的傳遞穿梭。
細(xì)胞內(nèi)鈣離子作為重要的信號分子其作用具有時(shí)間性和空間性。當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞興奮時(shí)，會產(chǎn)生一個(gè)電沖動，在此時(shí)，細(xì)胞外的鈣離子回流入該細(xì)胞內(nèi)，促使這個(gè)細(xì)胞分泌神經(jīng)遞質(zhì)，神經(jīng)遞質(zhì)與相鄰的下一級神經(jīng)細(xì)胞膜上的蛋白分子相結(jié)合，促使這個(gè)一級神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生新的電沖動。以此類推，神經(jīng)信號便一級一級地傳遞下去，從而構(gòu)成復(fù)雜的信號體系，形成了學(xué)習(xí)、記憶等大腦的高級功能。在哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)中，鈣離子同樣扮演著重要的信號分子的角色。利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑，將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來。
鈣是機(jī)體的組成元素之一。鈣離子作為電流載體維持細(xì)胞內(nèi)外的電化學(xué)梯度，同時(shí)在細(xì)胞的生命活動中扮演著重要角色。作為第二信使，鈣參與細(xì)胞周期、細(xì)胞代謝、細(xì)胞分化、壞死、凋亡等等許多重要的生理過程。細(xì)胞內(nèi)的鈣離子水平通常很低，一般胞漿中的自由鈣約為100nM。胞內(nèi)的鈣可被各種亞細(xì)胞器所貯存，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道：其中約50%位于細(xì)胞核，30%位于線粒體，14%位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，5%位于胞膜上，1%位于胞質(zhì)內(nèi)，且因?yàn)殁}離子易與磷酸和碳酸復(fù)合物形成不溶物，故游離鈣只占[1]。細(xì)胞可以通過鈣內(nèi)流、內(nèi)鈣釋放及膜系統(tǒng)上的降鈣蛋白等一整套完整的監(jiān)控系統(tǒng)來維持細(xì)胞內(nèi)鈣的內(nèi)穩(wěn)狀態(tài)。例如與鈣內(nèi)流相關(guān)的通道例如電壓門控性鈣離子通道VDCC、受體活躍的通道RACC；與內(nèi)鈣釋放相關(guān)的受體如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的IP3受體；以及降鈣相關(guān)的脂膜及線粒體上的主動運(yùn)輸?shù)拟}泵系統(tǒng)等等[2]。近20年來鈣的熒光成像及測定技術(shù)發(fā)展迅速，出現(xiàn)了各種各樣的鈣熒光指示劑，結(jié)合不斷發(fā)展的顯微成像系統(tǒng)，我們可以對活細(xì)胞的鈣離子進(jìn)行測定及成像，進(jìn)一步揭示其生理機(jī)制及相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制。鈣成像的熒光指示劑鈣成像的熒光探針一般均為Ca2螯合劑EGTA，APTRA，BAPTA的衍生物，它們可以結(jié)合鈣離子從而顯示一個(gè)光譜響應(yīng)。雙光子熒光顯微鏡能夠在進(jìn)行活動動物成像的時(shí)候?qū)崿F(xiàn)高分辨率和高信噪比。江蘇熒光顯微鈣成像grain lens
有了鈣成像技術(shù)，原本悄無聲息的神經(jīng)活動就變成了一幅斑斕閃爍的壯觀影像。重慶神經(jīng)元鈣成像售后保障
對新環(huán)境的探索確保了生存和進(jìn)化的適應(yīng)性，這是通過根據(jù)經(jīng)驗(yàn)動態(tài)變化的探索性回合和逮捕來表達(dá)的。因此，調(diào)節(jié)探索性行為的神經(jīng)環(huán)路應(yīng)該參與經(jīng)驗(yàn)的整合，并利用它來選擇適當(dāng)?shù)男袨檩敵?。通過空間探索分析，研究人員發(fā)現(xiàn)在之前動物被逮捕的地點(diǎn)，瞬間逮捕數(shù)隨著經(jīng)驗(yàn)的增加而增加。在自由探索的小鼠身上進(jìn)行的Inscopix鈣成像顯示，基底外側(cè)杏仁核中有一個(gè)遺傳和投射定義的神經(jīng)元群，在自我控制的行為停止期間是活躍的。這個(gè)合集是以經(jīng)驗(yàn)依賴的方式響應(yīng)的，對這些神經(jīng)元的nVoke閉環(huán)光遺傳操作表明，它們在探索過程中驅(qū)動經(jīng)驗(yàn)依賴的逮捕是充分和必要的。投影特異性成像和光遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示，這些yizhi是由投射到**杏仁核的基底外側(cè)杏仁核神經(jīng)元影響的，揭示了杏仁核環(huán)路，該回路介導(dǎo)了熟悉部位的短暫阻止，但不影響回避或焦慮/恐懼樣行為。重慶神經(jīng)元鈣成像售后保障
