科學(xué)家利用鈣成像技術(shù)記錄大腦活動。隨著功能光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展,神經(jīng)學(xué)家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況。功能鈣成像技術(shù)就是其中之一,其主要原理是將外源性熒光信號和生理現(xiàn)象耦合起來——通過熒光染料信號的改變反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度,以此daibiao細(xì)胞的功能狀態(tài)。目前它被廣泛應(yīng)用于實時監(jiān)測一群相關(guān)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,從而判斷其功能活動。該技術(shù)的出現(xiàn)使得科學(xué)家可以親眼目睹神經(jīng)信號在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)之中時間和空間上的傳遞穿梭。鈣成像技術(shù)(calcium imaging)是指利用鈣離子指示劑監(jiān)測組織內(nèi)鈣離子濃度的方法。超微顯微鈣成像供應(yīng)商
鈣離子成像技術(shù)(Calciumimaging)是指利用鈣離子指示劑監(jiān)測組織內(nèi)鈣離子濃度的方法,常用于神經(jīng)系統(tǒng)的研究,指示神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,提示神經(jīng)元活動。其原理在于借助鈣離子濃度與神經(jīng)元活動之間的嚴(yán)格對應(yīng)關(guān)系,利用特殊的熒光染料或者蛋白質(zhì)熒光探針(鈣離子指示劑,<spanlang=EN-US>Calciumindicator),將神經(jīng)元中鈣離子的濃度通過熒光強度表現(xiàn)出來,并被顯微鏡捕捉,從而達(dá)到監(jiān)測神經(jīng)元活動的目的。鈣離子在神經(jīng)元功能中起著重要的作用:它們作為細(xì)胞內(nèi)的信號可觸發(fā)響應(yīng),如改變基因表達(dá)和突觸囊泡中神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。由于細(xì)胞內(nèi)有離子泵在各種信號刺激下選擇性地運輸這些離子,胞內(nèi)鈣濃度是高度動態(tài)的。鈣成像利用鈣離子流的優(yōu)勢,在活神經(jīng)細(xì)胞上直接可視化鈣信號。深圳動物神經(jīng)元鈣成像nVoke鈣離子能產(chǎn)生許多控制細(xì)胞功能的胞內(nèi)信號,如突觸囊泡中神經(jīng)遞質(zhì)的釋放等。
指示劑是如何負(fù)載細(xì)胞,目前有三種在神經(jīng)元上填充鈣離子指示劑的方法,且都可以用于體內(nèi)和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個神經(jīng)元中。此方法方便實驗者控制單個神經(jīng)元內(nèi)的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負(fù)載神經(jīng)元,觀察對象為一群神經(jīng)元。盡管此方法可能導(dǎo)致一些膠質(zhì)細(xì)胞也被指示劑所標(biāo)記,但明顯提高了整體神經(jīng)元的標(biāo)記百分比,使研究者得以觀察到一群神經(jīng)元內(nèi)動作電位相關(guān)性的活動。第三種也較為常用,通過病毒轉(zhuǎn)染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑。
近年來出現(xiàn)了通過植入性的microscope或microlens進(jìn)行freelymoving動物鈣成像的技術(shù)。如光纖成像法:使用一端帶有GRINlens的光纖連接顯微鏡和動物大腦,從特定腦區(qū)發(fā)出的熒光信號被光纖收集,然后通過相機(jī)成像。動物頭部只需植入GRINlens,方便活動,而且可以同時植入多個lens來觀察不同的腦區(qū)之間的聯(lián)系和相互作用。還有直接植入動物大腦的微型熒光顯微鏡,將GRINlens直接植入皮層下的海馬,下丘腦,丘腦等區(qū)域,可以監(jiān)測深部腦區(qū)的神經(jīng)元活動。這種微型顯微鏡的重量只有幾克,不會影響動物自由活動,可以提供800μm600μm視野和1.50μm橫向分辨率。鈣成像技術(shù)在神經(jīng)科學(xué)研究中的應(yīng)用。
使用MPM對神經(jīng)元進(jìn)行鈣成像時,通過隨機(jī)訪問掃描—即激光束在整個視場上的任意選定點上進(jìn)行快速掃描—可以只掃描感興趣的神經(jīng)元,這樣不僅避免掃描到任何未標(biāo)記的神經(jīng)纖維,還可以優(yōu)化激光束的掃描時間。隨機(jī)訪問掃描可以通過聲光偏轉(zhuǎn)器(AOD)來實現(xiàn),其原理是將具有一個射頻信號的壓電傳感器粘在合適的晶體上,所產(chǎn)生的聲波引起周期性的折射率光柵,激光束通過光柵時發(fā)生衍射。通過射頻電信號調(diào)控聲波的強度和頻率從而可以改變衍射光的強度和方向,這樣使用1個AOD就可以實現(xiàn)一維橫向的任意點掃描,利用1對AOD,結(jié)合其他軸向掃描技術(shù)可實現(xiàn)3D的隨機(jī)訪問掃描。但是該技術(shù)對樣本的運動很敏感,易出現(xiàn)運動偽影。目前,快速光柵掃描即在FOV中進(jìn)行逐行掃描,由于利用算法可以輕松解決運動偽影而被guangfan的使用。神經(jīng)元鈣成像的原理是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現(xiàn)出來。神經(jīng)細(xì)胞鈣成像nVoke2.0
清醒動物腦功能鈣成像的微型顯微鏡的研究在不斷實踐中。超微顯微鈣成像供應(yīng)商
對于成像和長時間成像,較重要的是要保證細(xì)胞的正常生長。熒光團(tuán)受激發(fā)光光照后產(chǎn)生的氧化物質(zhì)與蛋白質(zhì)、核酸和脂肪等發(fā)生反應(yīng),熒光信號降低的同時(光致退色)也降低了細(xì)胞壽命(光線損傷)。在光照過程中氧化劑的產(chǎn)生,主要決定于熒光團(tuán)的光化學(xué)性質(zhì)和光照劑量,因此減少光照劑量成為解決上述問題的途徑之一。光漂白(Photobleaching)指在光的照射下熒光物質(zhì)所激發(fā)出來的熒光強度隨著時間推移逐步減弱乃至消失的現(xiàn)象。熒光成像的質(zhì)量很大程度上依賴于熒光信號強度,提高激發(fā)光強度固然可以提高信號強度,但激發(fā)光的強度不是可以無限提高的,當(dāng)激發(fā)光的強度超過一定限度時,光吸收就趨于飽和,并不可逆地破壞激發(fā)態(tài)分子,這就是光漂白現(xiàn)象。在顯微技術(shù)中,光漂白使得觀測變得很復(fù)雜,因為它會造成破壞,使螢光團(tuán)無法繼續(xù)放光,從而干擾實驗結(jié)果。超微顯微鈣成像供應(yīng)商