nVista神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)是可以在自由活動(dòng)的動(dòng)物上進(jìn)行大范圍的動(dòng)態(tài)熒光成像的設(shè)備。通過(guò)nVist,您可以視覺(jué)化細(xì)胞活動(dòng),同步行為學(xué),以及長(zhǎng)期追蹤神經(jīng)環(huán)路的活動(dòng)。nVista被應(yīng)用于全球的研究機(jī)構(gòu)中,產(chǎn)生了影響力的大數(shù)據(jù)庫(kù)。主要特征:利用GCamp鈣離子探針進(jìn)行成像功能完整的數(shù)據(jù)采集軟件,實(shí)現(xiàn)對(duì)焦,調(diào)焦,行為同步化單細(xì)胞分辨率下,可同時(shí)捕獲成百上千神經(jīng)元活動(dòng)長(zhǎng)時(shí)間追蹤細(xì)胞,追蹤時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)數(shù)月電子對(duì)焦,保證視野范圍的恒定自由動(dòng)物行為學(xué):可運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)行為學(xué)測(cè)量方法,行為操作箱,迷宮,曠場(chǎng)等可進(jìn)行皮層,深部核團(tuán),以及腦干,中腦等區(qū)域的成像記錄動(dòng)物無(wú)需進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練鈣離子成像+自由活動(dòng)行為學(xué)1.錨定特殊細(xì)胞類(lèi)型,例如特定的receptor/promotor/geneticmarker2.單細(xì)胞的空間分辨率,可以分析細(xì)胞在空間內(nèi)的mapping和編碼信息3.動(dòng)物可在大范圍的曠場(chǎng)內(nèi)自由活動(dòng)4.長(zhǎng)時(shí)程追蹤同一細(xì)胞的放電規(guī)律變化:用于學(xué)習(xí),記憶,藥物成癮等研究。5.可對(duì)腦內(nèi)的深部核團(tuán)進(jìn)行記錄nVista神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)成像效果好。神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)技術(shù)參數(shù)專(zhuān)業(yè)的數(shù)據(jù)采集軟件Inscopix數(shù)據(jù)采集軟件可記錄成百上千個(gè)神經(jīng)元細(xì)胞。電子調(diào)焦功能,可通過(guò)軟件實(shí)現(xiàn)物理調(diào)焦。鈣離子是哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的重要信使。神經(jīng)元鈣成像大概費(fèi)用
目前可用的指示劑較多,根據(jù)熒光光譜、與鈣離子親和力及其化學(xué)特性的不同大致分為化學(xué)性鈣離子指示劑和基因編碼鈣離子指示劑。前者指可特異性與鈣離子結(jié)合的小分子,常用的有fura-2、indo-1等;而后者主要指來(lái)源于綠色熒光蛋白GFP及其變異體的蛋白質(zhì),可與鈣調(diào)蛋白和肌球蛋白輕鏈激酶M13域結(jié)合,常用的有GCaMP、TN-XXL等,其中GCaMP5G和GCaMP6被廣泛應(yīng)用于在體鈣成像研究中。生物熒光蛋白:Aequorin是水母熒光素(coelenterazine)通過(guò)硫酸酯鍵或過(guò)氧化鍵緊緊連到脫輔水母發(fā)光蛋白上形成的,遇到鈣離子就發(fā)出470nm藍(lán)光,可以作為鈣離子的檢測(cè)試劑;化學(xué)鈣離子指示劑:Fura-2可在紫外光下被jihuo且發(fā)射出505-520nm光;基于FRET的基因編碼的鈣指示劑;單個(gè)熒光基因編碼的鈣指示劑。合肥光遺傳鈣成像nVoke我們的鈣成像系統(tǒng)集成自動(dòng)控制和精確計(jì)時(shí)的多模式輸入端口。
解決鈣成像裝置對(duì)核磁成像的干擾:考慮到金屬對(duì)核磁成像的影響,研究人員在核磁共振成像的模塊上裝上了鈣成像模塊,該成像模塊所有的金屬元件全部被更換為非導(dǎo)電塑料??紤]到磁場(chǎng)對(duì)光纖記錄系統(tǒng)的干擾,減少鈣信號(hào)的噪音,將相干光纖激光器與核磁共振放置相鄰不同的房間。解決鈣成像和核磁成像區(qū)域的一致性:在成像過(guò)程中,以皮層區(qū)域的血管分布為參照物,以保證鈣成像和核磁成像的區(qū)域基本保持一致。但在實(shí)際成像中,鈣離子變化和血氧水平依賴(lài)性信號(hào)所響應(yīng)的區(qū)域并不是完全重合。因此研究人員將響應(yīng)區(qū)域內(nèi)的信號(hào)變化幅度進(jìn)行均一化,盡量避免因統(tǒng)計(jì)閾值引起差異。
使用MPM對(duì)神經(jīng)元進(jìn)行鈣成像時(shí),通過(guò)隨機(jī)訪問(wèn)掃描—即激光束在整個(gè)視場(chǎng)上的任意選定點(diǎn)上進(jìn)行快速掃描—可以只掃描感興趣的神經(jīng)元,這樣不僅避免掃描到任何未標(biāo)記的神經(jīng)纖維,還可以?xún)?yōu)化激光束的掃描時(shí)間。隨機(jī)訪問(wèn)掃描可以通過(guò)聲光偏轉(zhuǎn)器(AOD)來(lái)實(shí)現(xiàn),其原理是將具有一個(gè)射頻信號(hào)的壓電傳感器粘在合適的晶體上,所產(chǎn)生的聲波引起周期性的折射率光柵,激光束通過(guò)光柵時(shí)發(fā)生衍射。通過(guò)射頻電信號(hào)調(diào)控聲波的強(qiáng)度和頻率從而可以改變衍射光的強(qiáng)度和方向,這樣使用1個(gè)AOD就可以實(shí)現(xiàn)一維橫向的任意點(diǎn)掃描,利用1對(duì)AOD,結(jié)合其他軸向掃描技術(shù)可實(shí)現(xiàn)3D的隨機(jī)訪問(wèn)掃描。但是該技術(shù)對(duì)樣本的運(yùn)動(dòng)很敏感,易出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)偽影。目前,快速光柵掃描即在FOV中進(jìn)行逐行掃描,由于利用算法可以輕松解決運(yùn)動(dòng)偽影而被guangfan的使用。鈣成像系統(tǒng)在自由行為動(dòng)物上對(duì)鈣離子動(dòng)態(tài)進(jìn)行單細(xì)胞分辨率級(jí)別的持久成像。
Anderson研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室雄性小鼠對(duì)雌性和雄性的攀爬行為可以通過(guò)是否存在超聲發(fā)聲(USV)來(lái)區(qū)分。這些和更多的行為數(shù)據(jù)表明,大多數(shù)雄性主導(dǎo)的攀爬是攻擊性的,盡管在極少數(shù)情況下可能是性行為。研究人員調(diào)查了USV+和USV-攀爬是否使用相同或不同的下丘腦神經(jīng)基質(zhì)。通過(guò)使用Inscopix自由行為顯微鈣成像方法觀察內(nèi)側(cè)視前區(qū)(MPOA)或腹內(nèi)側(cè)下丘腦腹側(cè)細(xì)分(VMHvl)中雌jisu受體1(ESR1)陽(yáng)性神經(jīng)元,發(fā)現(xiàn)在小鼠活動(dòng)中可以解碼出在USV+和USV-攀爬過(guò)程中神經(jīng)元活動(dòng)的獨(dú)特模式。交叉光遺傳刺激表達(dá)ESR1和囊狀GABA轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VGAT)的MPOA神經(jīng)元,可促進(jìn)USV+攀爬,并將雄性的定向攻擊轉(zhuǎn)換為USV攀爬。鈣成像顯微鏡由軟件控制的電子對(duì)焦方式,讓成像更加穩(wěn)定清晰。江蘇超微顯微鈣成像多少錢(qián)
傳統(tǒng)的鈣成像技術(shù)受限于顯微鏡的視野,只能對(duì)很小的一片區(qū)域進(jìn)行記錄。神經(jīng)元鈣成像大概費(fèi)用
目前有三種在神經(jīng)元上填充鈣離子指示劑的方法,且都可以用于體內(nèi)和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個(gè)神經(jīng)元中。此方法方便實(shí)驗(yàn)者控制單個(gè)神經(jīng)元內(nèi)的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負(fù)載神經(jīng)元,觀察對(duì)象為一群神經(jīng)元。盡管此方法可能導(dǎo)致一些膠質(zhì)細(xì)胞也被指示劑所標(biāo)記,但提高了整體神經(jīng)元的標(biāo)記百分比,使研究者得以觀察到一群神經(jīng)元內(nèi)動(dòng)作電位相關(guān)性的活動(dòng)。第三種也較為常用,通過(guò)病毒轉(zhuǎn)染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑。(A)單細(xì)胞注射法;(B)networkloading法;(C)通過(guò)病毒轉(zhuǎn)染使其基因編碼鈣離子指示劑(expressionofgeneticallyencodedcalciumindicators,GECI)神經(jīng)元鈣成像大概費(fèi)用