靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細胞內(nèi)鈣離子濃度約為50-100nM,而細胞興奮時鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍,增加的鈣離子對于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質(zhì)的過程必不可少。眾所周知,只有游離鈣才具有生物學(xué)活性,而細胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定,同時也受鈣結(jié)合蛋白的影響。細胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種,其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體、煙堿型膽堿能受體(nAChR)和瞬時受體電位C型通道(TRPC)等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現(xiàn)出來,以反映神經(jīng)元活性。該方法可以同時觀察多個功能或位置相關(guān)的腦細胞。想要同時觀察軸突和樹突的鈣離子信號,大視野是很重要的。江蘇鈣成像供應(yīng)商
鈣成像技術(shù)通常使用熒光染料或報告基因來標(biāo)記細胞中的鈣離子。當(dāng)細胞受到外界刺激時,鈣離子會進入細胞內(nèi),導(dǎo)致熒光染料或報告基因發(fā)出光信號。通過觀察光信號的強度和分布,可以推斷出鈣離子的濃度和分布情況。鈣成像技術(shù)具有以下優(yōu)點:高靈敏度:可以檢測到細胞內(nèi)微小的鈣離子濃度變化。實時性:可以實時記錄鈣離子濃度的變化過程??臻g分辨率高:可以清晰地觀察到鈣離子在細胞內(nèi)的分布情況。無創(chuàng)性:可以通過huo體成像技術(shù)觀察動物體內(nèi)的鈣離子變化情況??芍貜?fù)性:可以對同一群體細胞進行多次成像,以評估不同處理或刺激的影響??傊}成像技術(shù)是一種強大的生物醫(yī)學(xué)研究工具,可以幫助科學(xué)家們更好地了解細胞生理和病理狀態(tài),為疾病診斷和zhi療提供有力支持。江蘇超微顯微鈣成像grain lens雙光子熒光顯微鏡的發(fā)展,使在實驗動物處于活動狀態(tài)下的鈣成像技術(shù)取得了飛速進展。
nVista神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)是可以在自由活動的動物上進行大范圍的動態(tài)熒光成像的設(shè)備。通過nVist,您可以視覺化細胞活動,同步行為學(xué),以及長期追蹤神經(jīng)環(huán)路的活動。nVista被應(yīng)用于全球的研究機構(gòu)中,產(chǎn)生了影響力的大數(shù)據(jù)庫。主要特征:利用GCamp鈣離子探針進行成像功能完整的數(shù)據(jù)采集軟件,實現(xiàn)對焦,調(diào)焦,行為同步化單細胞分辨率下,可同時捕獲成百上千神經(jīng)元活動長時間追蹤細胞,追蹤時間可長達數(shù)月電子對焦,保證視野范圍的恒定自由動物行為學(xué):可運用標(biāo)準行為學(xué)測量方法,行為操作箱,迷宮,曠場等可進行皮層,深部核團,以及腦干,中腦等區(qū)域的成像記錄動物無需進行適應(yīng)性訓(xùn)練鈣離子成像+自由活動行為學(xué)1.錨定特殊細胞類型,例如特定的receptor/promotor/geneticmarker2.單細胞的空間分辨率,可以分析細胞在空間內(nèi)的mapping和編碼信息3.動物可在大范圍的曠場內(nèi)自由活動4.長時程追蹤同一細胞的放電規(guī)律變化:用于學(xué)習(xí),記憶,藥物成癮等研究。5.可對腦內(nèi)的深部核團進行記錄nVista神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)成像效果好。神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)技術(shù)參數(shù)專業(yè)的數(shù)據(jù)采集軟件Inscopix數(shù)據(jù)采集軟件可記錄成百上千個神經(jīng)元細胞。電子調(diào)焦功能,可通過軟件實現(xiàn)物理調(diào)焦。
目前可用的指示劑較多,根據(jù)熒光光譜、與鈣離子親和力及其化學(xué)特性的不同大致分為化學(xué)性鈣離子指示劑和基因編碼鈣離子指示劑。前者指可特異性與鈣離子結(jié)合的小分子,常用的有fura-2、indo-1等;而后者主要指來源于綠色熒光蛋白GFP及其變異體的蛋白質(zhì),可與鈣調(diào)蛋白和肌球蛋白輕鏈激酶M13域結(jié)合,常用的有GCaMP、TN-XXL等,其中GCaMP5G和GCaMP6被廣泛應(yīng)用于在體鈣成像研究中。生物熒光蛋白:Aequorin是水母熒光素(coelenterazine)通過硫酸酯鍵或過氧化鍵緊緊連到脫輔水母發(fā)光蛋白上形成的,遇到鈣離子就發(fā)出470nm藍光,可以作為鈣離子的檢測試劑;化學(xué)鈣離子指示劑:Fura-2可在紫外光下被jihuo且發(fā)射出505-520nm光;基于FRET的基因編碼的鈣指示劑;單個熒光基因編碼的鈣指示劑。對鈣離子的功能研究中,鈣指示劑是必不可少的工具。
CaMPARI,一種能夠兼顧全局和微觀的新型鈣成像技術(shù),包含CaMPARI以及CaMPARI2(第二代)。其原理在于,CaMPARI蛋白在正常狀態(tài)下會發(fā)出綠色熒光,而如果對這種蛋白同時使用高濃度鈣離子與紫外光處理,它就會不可逆、長久地轉(zhuǎn)變成另一種能發(fā)出紅色熒光的構(gòu)象,即實現(xiàn)將瞬間的神經(jīng)元活動變成長久的紅色熒光蛋白表達。研究人員通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將這種新型蛋白導(dǎo)入到實驗動物的神經(jīng)系統(tǒng)中,然后用度的紫外光照射動物的大腦,通過檢查熒光,找到發(fā)紅色熒光的神經(jīng)元,這些神經(jīng)元即是在紫外光照射期間活躍的神經(jīng)元。由于紫外光可以對著整個大腦進行照射,所以理論上,人們可以對全腦進行檢查。通過鈣成像技術(shù)發(fā)現(xiàn)當(dāng)神經(jīng)元活動的時候,胞內(nèi)鈣離子濃度能上升 10 - 100 倍。江蘇鈣成像供應(yīng)商
鈣是模型動物神經(jīng)細胞內(nèi)重要的第二信使,參與細胞多種功能的調(diào)節(jié),可以產(chǎn)生多種細胞內(nèi)信號。江蘇鈣成像供應(yīng)商
對于雙光子(2P)鈣成像而言,離焦和近表面熒光激發(fā)是兩個大的深度限制因素,而對于三光子成像這兩個問題大大減小,但是三光子成像由于熒光團的吸收截面比2P要小得多,所以需要更高數(shù)量級的脈沖能量才能獲得與2P激發(fā)的相同強度的熒光信號。功能性三光子顯微鏡比結(jié)構(gòu)性三光子顯微鏡的要求更高,它需要更快速的掃描,以便及時采樣神經(jīng)元活動;需要更高的脈沖能量,以便在每個像素停留時間內(nèi)收集足夠的信號。復(fù)雜的行為通常涉及到大型的大腦神經(jīng)網(wǎng)絡(luò),該網(wǎng)絡(luò)既具有局部的連接又具有遠程的連接。要想將神經(jīng)元活動與行為聯(lián)系起來,需要同時監(jiān)控非常龐大且分布guangfan的神經(jīng)元的活動,大腦中的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)會在幾十毫秒內(nèi)處理傳入的刺激,要想了解這種快速的神經(jīng)元動力學(xué),就需要MPM具備對神經(jīng)元進行快速成像的能力??焖費PM方法可分為單束掃描技術(shù)和多束掃描技術(shù)江蘇鈣成像供應(yīng)商