在不同的鹽濃度條件下，AAV病毒載體的存在形式不同。低鹽濃度條件下，AAV病毒顆粒表面會通過電荷作用等非特異結(jié)合到HCD上，從而產(chǎn)生病毒顆粒團(tuán)聚現(xiàn)象。隨著溶液鹽濃度上升，AAV病毒顆粒與HCD的離子相互作用會被破壞，AAV病毒顆粒會逐漸解離。當(dāng)鹽濃度升到更高范圍（>400mM左右），AAV病毒顆粒與HCD的結(jié)合更弱，AAV顆粒更穩(wěn)定。因此，在高鹽濃度溶液中，AAV顆粒更加穩(wěn)定，且有數(shù)據(jù)表明高鹽濃度不會削弱AAV的侵染能力。所以，我們推薦提高AAV病毒生產(chǎn)中的鹽濃度。無需為了保持高酶活而進(jìn)行脫鹽操作，簡化工藝、節(jié)省時間；江西高鹽核酸酶
已有文獻(xiàn)表明，高鹽濃度能夠破壞染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，讓核小體解聚。在能耐受高鹽條件的病毒載體（如AdV/AAV等）生產(chǎn)中，高鹽濃度使宿主細(xì)胞DNA（HCD）解聚，讓核酸片段暴露，提高了核酸片段的可及性。而ArcticZymes的SAN HQ高鹽核酸酶能夠在高鹽條件下更好發(fā)揮酶切活性，作為高鹽條件下去除HCD的更好選擇。SAN HQ高鹽核酸酶的出現(xiàn)，讓一些通過常規(guī)方法很難解決的工藝問題得到高效解決，不僅提高了生產(chǎn)效率，降低了藥物生產(chǎn)成本，更拓寬了生物工藝生產(chǎn)的邊界。四川進(jìn)口生物試劑高鹽核酸酶宿主細(xì)胞DNA主要以染色質(zhì)形態(tài)存在，其中的組蛋白通過離子相互作用及疏水相互作用與DNA緊密結(jié)合；
氯化銫(CsCl)/碘克沙醇密度梯度離心大概是經(jīng)典的AAV純化技術(shù)了。這種技術(shù)適用于所有血清型且分辨率高，但是因生產(chǎn)工藝很難放大，低通量等缺點(diǎn)阻礙了其在工業(yè)中的應(yīng)用。繼密度梯度離心之后，色譜法不斷發(fā)展，并逐漸成為一種成熟的、主流的方法。色譜法通過載體的凈電荷、疏水性、對配體的親和性、大小以及其他性質(zhì)來分離并純化載體。這類技術(shù)有諸多的優(yōu)點(diǎn)：更具可擴(kuò)展性和成本效益，可多次重復(fù)使用，可并行運(yùn)行或串聯(lián)運(yùn)行，還可有效去除非定植劑，這是開發(fā)后期的一個關(guān)鍵方面。
監(jiān)管部門對HCD的殘留量有明確的規(guī)定。美國FDA發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品HCD殘余限度為 100pg/劑，對于大劑量生物制品如單克隆抗體，根據(jù)其殘留DNA來源及給藥途徑，殘留量可放寬至 10ng/劑。細(xì)胞基因藥物終產(chǎn)品的DNA殘留有兩種來源，分別是宿主細(xì)胞DNA（HCD）和轉(zhuǎn)染用的質(zhì)粒。質(zhì)粒和HCD的存在形式不同，去除效率也差別很大。其中，質(zhì)粒是裸露的DNA雙鏈，帶強(qiáng)負(fù)電荷，通過色譜純化主要是離子交換能夠很高效去除；HCD則是以核小體緊密折疊形成的染色質(zhì)形式存在，幾乎不以裸DNA形式存在，所以很難去除。SAN HQ高鹽核酸酶具有熱不穩(wěn)定的特性，在還原劑存在條件下，50℃、30min孵育即可失活；
核酸酶活性受到很多因素影響，如鹽濃度、pH、底物、溫度等。因此，不同客戶、不同項(xiàng)目中核酸酶的使用條件都不一樣。目前，生物制藥行業(yè)對Benonase全能核酸酶的使用比較熟悉，如生理鹽或低鹽濃度、脫鹽操作等。對于AdV/AAV等項(xiàng)目，使用SAN HQ高鹽核酸酶替代Benzonase時，只需提高反應(yīng)體系總鹽濃度到400mM-500mM即可，溫度、Mg2+濃度等條件不用做任何調(diào)整，同樣酶量的SAN HQ對宿主細(xì)胞DNA（HCD）的去除效果更好、病毒載體得率更高。經(jīng)過工藝優(yōu)化后，可以將SAN HQ高鹽核酸酶的用量減少到原來的1/3-1/4，且HCD去除效果及產(chǎn)品得率更高。SAN HQ高鹽核酸酶在鹽濃度400-650mM條件下活性達(dá)到峰值。重慶上海倍篤生物高鹽核酸酶70921-202
在如抗體、病毒載體藥物等的生產(chǎn)工藝流程中，核酸雜質(zhì)的去除至關(guān)重要。江西高鹽核酸酶
宿主細(xì)胞DNA殘留的擔(dān)憂是基于致ai風(fēng)險理論，特別是生產(chǎn)細(xì)胞系所包含的致ai序列，比如較常見腺病毒基因E1A和E1B（HEK293, PerC.6 和CAP 細(xì)胞系），人乳tou瘤病毒E6和E7基因（HeLa細(xì)胞系)等。當(dāng)使用致ai細(xì)胞系生產(chǎn)AAV時，下游純化須盡可能減少殘留DNA。工業(yè)上一般使用核酸酶分解殘留DNA，普遍認(rèn)為小于200 bp的DNA片段可有效降低致ai風(fēng)險。宿主細(xì)胞蛋白殘留與免疫原性、炎癥或過敏性休克有關(guān)。盡管與非人類的生產(chǎn)原料相比（非人類細(xì)胞系如BHK21或昆蟲細(xì)胞，以及輔助病毒如HSV、腺病毒、桿狀病毒），人類細(xì)胞免疫原性比較弱。江西高鹽核酸酶
從細(xì)胞中釋放AAV載體的基本機(jī)械技術(shù)是反復(fù)冷凍/解凍，然后是低速離心步驟然而，但是這種技術(shù)很難放大生...
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