已有的流行病學研究顯示，單精子胞漿注射技術(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)可能導致出生小孩泌尿系統(tǒng)疾病的發(fā)生率增加.印記基因印記狀態(tài)的改變與泌尿系統(tǒng)疾病相關，而ICSI操作正是發(fā)生在印記基因甲基化重新建立的關鍵時期，所以本研究的目的是研究ICSI技術對小鼠腎臟印記基因表達及甲基化狀況的影響，從分子水平上研究ICSI技術對子代泌尿系統(tǒng)的影響，建立ICSI小鼠模型，以2-細胞移植組和自然妊娠組為對照，分別取10周，1.5年小鼠腎臟，用real-time RT-PCR的方法測定h19,igf2,mest,peg3和snrpn的mRNA表達水平，對h19和snrpn進一步用亞硫酸鹽測序方法測定甲基化水平.我們的結果顯示***促排卵和單精子胞漿注射都能影響h19,mest,peg3和snrpn的mRNA表達水平，而mRNA表達水平的改變主要不是通過甲基化調控，提示ICSI操作確實會導致子代腎臟印記基因表達水平的改變，而引起這種改變的機制還需要進一步研究。壓電破膜儀PMM 6用于RNA注射。深圳細胞內膜打孔壓電力度溫和

1927年，伍德（R.W.Wood）與魯密斯（A.L.Loomis）首先使用高功率超聲波。使用藍杰文型的石英換能器配合高功率真空管，在液體中產生高能量，使液體引起所謂的空腔（cavitation）現(xiàn)象。同時也研究高功率超聲波對生物試樣的效應。在水下音響（underwatersound）的研究中發(fā)現(xiàn)，石英晶體并不是很好的換能器材料，但是它的振蕩頻率卻不隨溫度而變，亦即所謂的具有低的溫度系數(shù)。這種頻率對溫度的高穩(wěn)定性，用在控制振蕩器的頻率，及某些濾波器上**有用。1919年，卡迪（Cady）教授***次利用石英當做頻率控制器，圖四就是**早期的晶體控制振蕩器電路。因為晶體具有極高的Q值（注三），振蕩器的頻率受到晶體共振頻率的控制，且頻率不隨溫度變化而變。后來，皮爾士和皮爾士-米勒（Pierce-Miller）又發(fā)明一種以后廣被采用的晶體控制振蕩電路。在第二次世界大戰(zhàn)中，大約使用了一千萬個晶體振蕩器，用以建立坦克與坦克之間及地面和飛機之間的通訊。日本PMM 壓電基因重組PMM利用壓電單元的快速形變的慣性力來驅動顯微注射針，可以平滑地穿透透明帶和彈性細胞膜。

為什么具有“脆性卵膜”的卵子ICSI后容易退化？如下：一、卵子成熟度不足。卵子的成熟包括核成熟（以排出***極體為標志）以及胞質成熟，而胞質成熟往往滯后于核成熟，兩者并不完全同步。有對照研究表明，脆性卵膜組的成熟卵細胞比例***低于正常破膜組，ICSI后卵子退化率也高于正常破膜組，這提示了卵子成熟度與卵膜脆性具有一定的相關性，并**終影響了卵子ICSI后是否存活。二、雌***水平。到目前為止，關于雌***水平對脆性卵膜的影響，現(xiàn)有的研究結論并不一致，但歸根到底仍然可能是通過影響卵子成熟來改變卵膜的特性。三、ICSI機械操作。一方面ICSI是侵襲性操作，可能破壞卵膜、細胞骨架等細胞器，另一方面是具有脆性卵膜的卵子缺乏“漏斗”的保護作用，細胞骨架和卵膜更容易在ICSI過程中崩解。為避免脆性卵膜卵子ICSI后退化，除了改善注射方式（如進針前利用激光穿透或削薄透明帶，操作盡可能輕柔等），還可采用改進的Piezo-ICSI（壓電脈沖破膜輔助ICSI），能有效改善注射后卵子退化的情況。此外，在臨床促排卵方面，也可考慮調整藥物用量，在保證卵泡大小均勻的情況下，盡量推遲扳機時間，提高卵母細胞成熟度，減輕ICSI后卵子退化的比例，以盡可能保證ART***的效果。

Piezo-ICSI程序:

使用直徑100-mm的細胞培養(yǎng)皿上蓋,準備操作盤；按照Piezo操作系統(tǒng)的要求，將4μL左右的汞從后部裝入注射針中，輕輕將汞推至針尖處，在20-25℃室溫下，準備進行顯微操作。具體操作前，首先取10枚卵母細胞置于15L含3 % suerose的HEPES-CZB操作滴中備用；然后將2.5μL精子溶液與5pLHEPES-CZB+ 12 % PVP-360操作滴充分混合；再將單個精子從尾部吸入注射針，用Piezo脈沖從頸部斷開頭和尾；連續(xù)剪切5個精子后，將吸入全部精子頭的注射針轉移到放置卵母細胞的操作滴中，準備將精子頭逐個注射至卵母細胞質中。注射時，從時鐘9點的方向吸住卵母細胞，使紡錘體保持在6點或12點的位置，從3點的方向輕輕進針，同時用Piezo脈沖擊穿透明帶，將透明帶碎片吹出注射針的同時，將精子頭吹至針尖處，繼續(xù)進針，直至針尖插入卵母細胞深處，幾乎貼近對側質膜時，用Piezo弱脈沖擊穿卵母細胞質膜，將精子頭吐出，回吸注入卵內多余的操作液，輕輕退針，完成一次注射。依次操作，盡快實現(xiàn)該批卵母細胞的注射，室溫放置5min,然后用大量CZB溶液洗滌ICSI胚胎，并且移入CO?箱培養(yǎng)。依法進行第二批卵母細胞的精子頭注射，在注射HCG后17 h,完成全部卵母細胞的精子注射。 PRIME TECH PMM 用于小鼠ICSI。

在工業(yè)上，地質探測儀里有壓電陶瓷元件，用它可以判斷地層的地質狀況，查明地下礦藏。還有電視機里的變壓器——電壓陶瓷變壓器，它體積變小、重量減輕，效率可達60%～80%，能耐住3萬伏的高壓，使電壓保持穩(wěn)定，完全消除了電視圖象模糊變形的缺陷?，F(xiàn)在國外生產的電視機大都采用了壓電陶瓷變壓器。一只15英寸的顯像管，使用75毫米長的壓電陶瓷變壓器就行了。這樣就使電視機體積變小、重量減輕了。壓電陶瓷也***用于日常生活中。用了兩個直徑3毫米、高5毫米的壓電陶瓷柱取代了普通的火石制成的氣體電子打火機，可連續(xù)打火幾萬次。利用同一原理制成的電子點火***是點燃煤氣爐極好的用具。還有一種用壓電陶瓷元件制作的兒童玩具，比如在玩具小狗的肚子中安裝壓電陶瓷制作的蜂鳴器，玩具都會發(fā)出逼真有趣的聲音。隨著高新技術的發(fā)展，壓電陶瓷的應用必將越來越廣闊。除了用于高科技領域，它更多的是在日常生活中為人們服務，為人們創(chuàng)造更美好的生活。PRIME TECH PMM 6可用于DNA注射。深圳壓電核轉移

壓電破膜儀 PMM PIEZO-ICSI的使用不僅可以提高受精成功率，還可以減少操作的時間和風險，提高工作效率。深圳細胞內膜打孔壓電力度溫和

以piezo操作系統(tǒng)為技術支撐，在掌握小鼠卵母細胞胞漿內精子注射技術(ICSI)的基礎上，進行了ICSI技術生產試管小鼠及轉基因小鼠的嘗試。實驗結果表明以Hepes-CZB+3％蔗糖做操作液，用來自成年KM鼠附睪尾的新鮮精子頭和pEGFP-N1質粒孵育處理凍融精子頭，直接注射到B6D2 F1小鼠卵母細胞質中，注射后1h，83.3％的卵母細胞仍然存活，鮮精組和凍精組各有92.3％和83.0％成活卵子排出極體、出現(xiàn)原核。用CZB溶液繼續(xù)培養(yǎng)ICSI胚胎，兩組的卵裂率、桑椹胚率、囊胚率分別為(97.8％vs 94.7％)、(64％vs 64.5％)、(5％，vs 24.7％)。其中桑椹胚率、囊胚率均***低于體內受精對照組(64％，64.5％vs 88％；5％，24.7％vs70％P＜0.01)；將鮮精組原核期120枚胚胎和82枚2-cell胚胎及凍精組135枚原核期胚胎移植后移植到同期km假孕母鼠受體內，分別出生28只、3只、18只ICSI小鼠(黑色或灰色)，效率分別為23.3％，4％，13.3％。健康成年的31只ICSI小鼠，沒有明顯的生理和行為異常。隨機抽取六對鮮精組性成熟ICSI小鼠做交配實驗，一個月后都有小鼠出生(平均窩產10.7只)。本實驗表明，ICSI精子載體法可以比較高地制造小鼠轉基因胚胎，小鼠附睪新鮮精子及無抗凍劑保護冷凍致死精子都具有足夠的全程發(fā)育潛力。深圳細胞內膜打孔壓電力度溫和