超濾離心管使用的是再生纖維素膜,這種材質(zhì)是蛋白吸附較低的超濾膜。但是對于一些疏水性蛋白或非極性蛋白,它們和膜的非特異吸附可能會增強(qiáng),對于這種情況,可以嘗試在實驗前對超濾管進(jìn)行封閉處理,也可以嘗試換成Amicon Ultra0.5或2來進(jìn)行實驗,通過減小膜面積來降低非特異性吸附。超濾膜含有微量甘油。如果此成分干擾分析,可用緩沖液或Milli-Q水預(yù)清洗。如果干擾仍存在,用0.1N NaOH清洗,然后用緩沖液或Milli-Q水再次清洗后甩干。超濾離心管通常具有標(biāo)準(zhǔn)化設(shè)計,使其易于與其他實驗室設(shè)備集成使用。溫州離心管供應(yīng)商
離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經(jīng)0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續(xù)三次,之后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定,一般不多于500ul,也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達(dá)到1000倍以上,基本上可以達(dá)到換buffer的目的。100K超濾離心管超濾離心管在基礎(chǔ)科學(xué)研究中也具有重要意義,如蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析、酵母遺傳學(xué)等領(lǐng)域。
超濾管,即超濾離心管,是生物、化學(xué)實驗室非常重要的分離裝置。超濾管可以去除蛋白質(zhì)及大分子雜質(zhì),經(jīng)常用于蛋白濃縮和更換緩沖液的操作,超濾是實驗室常用的分離技術(shù),是一種加壓膜分離技術(shù),膜孔徑介于微濾和反滲透之間,通過膜表面的微孔結(jié)構(gòu)對物質(zhì)進(jìn)行選擇性分離。在一定壓力下,小分子物質(zhì)可穿過一定孔徑的特制薄膜,而大分子物質(zhì)不能透過,從而將小分子與生物大分子分開,實現(xiàn)濾除微小固型顆粒物、大分子、病毒以及細(xì)菌等微生物的目的。超濾管一般由蓋子、過濾器和離心管三個部分組成。超濾管具有快速超過濾功能,能夠達(dá)到較高的濃縮系數(shù),易于從稀釋液或復(fù)雜的樣本組合中進(jìn)行濃縮液回收,其豎式設(shè)計以及可用的濾膜表面面積能夠提供快速的樣本處理速度和較高的樣本回收率,并能進(jìn)行80倍濃縮。
市場上常見離心管主要分為兩種:即:塑料離心管 和玻璃離心管,也有少數(shù)是鋼制離心管。使用玻璃管時離心力不宜過大,需要墊橡膠墊,防止管子破碎,高速離心機(jī)一般不選用玻璃管。離心管蓋子封閉性不夠好,液體就不能加滿(針對高速離心機(jī)且使用角轉(zhuǎn)子)以防外溢,失去平衡。外溢后果是污染轉(zhuǎn)子和離心腔,影響感應(yīng)器正常工作。超速離心時,液體一定要加滿離心管,因為超離需要抽高真空,只有加滿才能避免離心管變形。而鋼制離心管強(qiáng)度大,不變形,能抗熱,抗凍,抗化學(xué)腐蝕,它的應(yīng)用也是相當(dāng)普遍但使用時同樣也應(yīng)避免接觸強(qiáng)腐蝕性的化學(xué)藥品,如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等。盡量避免這些化學(xué)物質(zhì)的腐蝕。超濾離心管可以用于制備疫苗、抗體等生物制品,以緩解某些疾病。
超濾離心管使用方法和注意事項:1、選擇合適的超濾離心管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾離心管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾離心管。2、新買來的超濾是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕,加入蛋白液前,超濾離心管需要插在冰上預(yù)冷。3、質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速rpm換算成g之后,有所不同。離心機(jī)的加速度調(diào)至低檔,減小對膜的壓力。注意,一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后,方可離開離心機(jī),否則離心機(jī)出問題時,無法*時間處理,后果不可預(yù)測!超濾離心管的選擇取決于被過濾的溶液或混合物的性質(zhì)及所需的純度和體積。高離心力離心管生產(chǎn)廠
超濾離心管還可用于檢測食品樣品中的致病菌、重金屬等污染物,并進(jìn)行食品安全監(jiān)測和控制。溫州離心管供應(yīng)商
超濾離心管的原理:根據(jù)標(biāo)稱分子量限值(NMWL)的不同,典型處理時間為10-30分鐘。超濾膜的垂直設(shè)計也較大程度降低了溶質(zhì)極化造成的濾膜結(jié)垢;Chemicalbook死體積設(shè)計能有效防止過度離心使樣本干掉而造成樣本損失。收集濾出液后,濃縮樣本(截留部分)可通過一個簡便的倒置(上下反轉(zhuǎn))離心步驟而實現(xiàn)高效回收。超濾離心管的應(yīng)用:1)濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸(DNA/RNA樣本,單鏈或雙鏈)、噬菌體等微生物樣本2)純化組織培養(yǎng)提取液或細(xì)胞裂解液中的大分子成分,去除反應(yīng)液中的引物、接頭或分子標(biāo)記,在HPLC前去除蛋白質(zhì)。3)除鹽,緩沖液更換,或滲濾。溫州離心管供應(yīng)商
在使用超濾離心管時,離心速度和時間的選擇對分離效果至關(guān)重要。過高的離心速度可能導(dǎo)致膜破裂、樣本過熱,... [詳情]
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2025-04-27