超濾離心管的分子量選擇:按照樣品量和目標(biāo)分子量選擇適當(dāng)?shù)某瑸V離心管,為了得到較高的收率,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,不超過(guò)目標(biāo)分子量的一半。因?yàn)槌瑸V膜上孔徑是平均孔徑,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的超濾管多次重復(fù)加樣離心。如果同時(shí)需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì),可將待濃縮樣品稀釋到超濾管較大容積再離心,重復(fù)2次可除去99%鹽。避免過(guò)長(zhǎng)時(shí)間或者過(guò)速離心,雖然優(yōu)良品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設(shè)計(jì),可避免過(guò)度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過(guò)度濃縮,體積越小,越容易因表面吸附而損失得率。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時(shí)補(bǔ)加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。超濾離心管通常由聚碳酸酯或聚丙烯制成,具有強(qiáng)度高和化學(xué)惰性。紹興高離心力離心管定做
A(聚酰胺):這種材質(zhì)是PP和PE材質(zhì)的聚合物,半透明,化學(xué)性質(zhì)非常穩(wěn)定,單不耐高溫。PF(聚氟):半透明,可以低溫使用,如果是-100℃-140℃下的實(shí)驗(yàn)環(huán)境,就可以用這種材質(zhì)的離心管。CAB(醋酸丁酯纖維素):透明,可用于較稀的酸、堿、鹽,以及酒精、蔗糖的梯度測(cè)定。PS(聚苯乙烯):透明,硬度大,對(duì)大多數(shù)的水溶液穩(wěn)定,但是會(huì)被多種有機(jī)物腐蝕,多用于低速離心,而且一般是一次性使用。離心管分類(lèi):按材質(zhì)可分:塑料離心管、玻璃離心管和不銹鋼離心管等。按速度可分:低速離心管和高速離心管。按容量可分:微量離心管、小容量離心管和大容量離心管。一般稱(chēng)容量大于100mL的離心管為離心瓶。北京蛋白分離離心管制造廠使用超濾離心管時(shí)需要注意樣品制備和pH調(diào)整等實(shí)驗(yàn)步驟,以確保較佳結(jié)果。
使用后用0.1M NaOH泡24h,然后20%乙醇浸泡保存。這個(gè)我是聽(tīng)老板們說(shuō)的,的確乙醇泡完后孔徑會(huì)增大,基本就是5-10KD較大,也就是說(shuō)如果你的蛋白在21KD以上,應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題?;蛘呖梢圆挥靡掖寂荩肗aOH洗之后直接用無(wú)菌水保存,每周換一下液體,應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題。看看說(shuō)明書(shū)不就結(jié)了!我原來(lái)在CRO的時(shí)候一直是重復(fù)用的,也沒(méi)見(jiàn)什么不好??!短期會(huì)用的話(huà),用20%的乙醇泡著,回頭拼命用millipore的水充干凈,然后在用樣品緩沖液平衡一下就好,至于有些人說(shuō)的改變孔徑,也沒(méi)那么大影響的,你至少跟目的蛋白分子量差別3倍的截留分子量才安全的不是嗎?1個(gè)月以?xún)?nèi)不用的話(huà),建議用100mM的NaOH保存!更長(zhǎng)時(shí)間的話(huà)加0.02%的疊氮鈉,但那個(gè)東西強(qiáng)致疾病物,不建議使用。理論上截留目標(biāo)物,孔徑應(yīng)選1/3~1/5的膜;透過(guò)目標(biāo)物,孔徑應(yīng)選5-10倍的膜。
可以通過(guò)多個(gè)超濾管同時(shí)超濾來(lái)降低濃度,而后者通過(guò)改變不同的緩沖液直到?jīng)]有蛋白質(zhì)沉淀。用來(lái)濃縮蛋白質(zhì)的。如果要更換緩沖液,當(dāng)總蛋白溶液濃縮到1毫升左右時(shí),輕輕添加一個(gè)新的緩沖液〈用0.22um超濾膜超濾后〉,然后連續(xù)濃縮到1毫升左右。濃縮液的之后體積取決于所需的蛋白質(zhì)濃度,通常不超過(guò)500 ul,但也要濃縮到200 ul以下。根據(jù)每次至少10次的體積濃度計(jì)算,1000次以上的3次基本可以達(dá)到更換緩沖器的目的。提取之后濃縮蛋白的操作在冰上進(jìn)行。黃色設(shè)備頭(200ul)用于提取之后的蛋白質(zhì)濃縮物。設(shè)備頭沿設(shè)備頭邊緣輕輕插入。將蛋白溶液輕輕吹勻。注意不要觸摸超濾膜。吸取濃縮液,一次較多吸200 ul,直至耗盡。之后留在管底的濃縮液不需要吸收,否則太困難,可能損壞超濾膜。之后,在無(wú)超濾膜的超濾管中加入milliq水,以防止超濾膜干燥。超濾離心管可以去除混合物中的雜質(zhì)和低分子量化合物,得到高純度的目標(biāo)化合物。
以下是處理超濾管,重復(fù)利用超濾管的步驟。倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤(rùn)洗幾次,【若管底有可見(jiàn)的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用設(shè)備頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀懸起,然后倒掉,不可用自來(lái)水猛沖】然后加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個(gè)小時(shí),再換新的水,放置幾個(gè)小時(shí),不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來(lái)水洗,內(nèi)壁再用MilliQ水洗干凈。取出浸沒(méi)的管芯,加至接近滿(mǎn)的MilliQ水,50ml管也加滿(mǎn)MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml。離心管,排出部分水,然后蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來(lái)說(shuō),按照上述步驟和注意事項(xiàng),每根管用三四年不會(huì)壞。使用超濾離心管時(shí)應(yīng)注意保持其清潔和衛(wèi)生,并定期更換超濾膜以確保較佳效果。北京蛋白分離離心管制造廠
超濾離心管在食品安全監(jiān)測(cè)中也具有重要意義,如檢測(cè)水產(chǎn)品中的重金屬等有害物質(zhì)。紹興高離心力離心管定做
離心技術(shù)主要用于各種生物樣品的分離和制備,生物樣品懸浮液盛放在離心管中在高速旋轉(zhuǎn)下,由于巨大的離心力作用,使懸浮的微小顆粒(如細(xì)胞器、生物大分子的沉淀等) 以一定的速度沉降,從而與溶液得以分離。而離心管就是離心試驗(yàn)中必備的實(shí)驗(yàn)耗材之一。含有帶電的或者疏水結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)更易于不可逆結(jié)合到不同表面。對(duì)超濾離心管表面做鈍化預(yù)處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失,大多數(shù)情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預(yù)處理柱子可以提高回收率,因?yàn)槿芤嚎商顫M(mǎn)膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點(diǎn)。鈍化的方法是預(yù)先用較高容積的鈍化溶液預(yù)浸泡柱子1小時(shí)以上,蒸餾水徹底沖洗柱子,再用蒸餾水離心一次以徹底除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。如果要留待以后使用,需要加無(wú)菌蒸餾水保持膜濕潤(rùn)。紹興高離心力離心管定做
超濾離心管具有多種容量和規(guī)格,以滿(mǎn)足不同實(shí)驗(yàn)需求。在選擇時(shí),需綜合考慮樣本量、目標(biāo)分子濃度、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.. [詳情]
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2025-04-27