可以通過多個超濾管同時超濾來降低濃度,而后者通過改變不同的緩沖液直到?jīng)]有蛋白質(zhì)沉淀。用來濃縮蛋白質(zhì)的。如果要更換緩沖液,當總蛋白溶液濃縮到1毫升左右時,輕輕添加一個新的緩沖液〈用0.22um超濾膜超濾后〉,然后連續(xù)濃縮到1毫升左右。濃縮液的之后體積取決于所需的蛋白質(zhì)濃度,通常不超過500 ul,但也要濃縮到200 ul以下。根據(jù)每次至少10次的體積濃度計算,1000次以上的3次基本可以達到更換緩沖器的目的。提取之后濃縮蛋白的操作在冰上進行。黃色設(shè)備頭(200ul)用于提取之后的蛋白質(zhì)濃縮物。設(shè)備頭沿設(shè)備頭邊緣輕輕插入。將蛋白溶液輕輕吹勻。注意不要觸摸超濾膜。吸取濃縮液,一次較多吸200 ul,直至耗盡。之后留在管底的濃縮液不需要吸收,否則太困難,可能損壞超濾膜。之后,在無超濾膜的超濾管中加入milliq水,以防止超濾膜干燥。超濾離心管可用于分離細胞培養(yǎng)上清中的蛋白質(zhì)和小分子物質(zhì)。江蘇高離心力離心管廠家電話
超濾離心管只需5到15分鐘,即可對50到500L樣本進行簡便、可靠的濃縮與脫鹽處理:快速處理樣本。通常,回收率高于90%;備有低蛋白質(zhì)結(jié)合的Omega、Bio-Inert或GHP濾膜可供選擇。對應各種截留分子量,備有各種編碼以供輕松識別的顏色可供選擇。結(jié)構(gòu)材料為低結(jié)合聚丙烯。超聲焊接密封,防止側(cè)流或密封不嚴。適用于配合1.5mL試管的標準離心轉(zhuǎn)子。超濾離心管通常不需要預處理即可使用,不過對于蛋白質(zhì)樣本處理,特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附較小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時候,會有問題。非特異結(jié)合的程度隨著個別蛋白結(jié)構(gòu)的不同而不同。金華濃縮超濾離心管品牌使用超濾離心管時應注意避免過度旋轉(zhuǎn)或操作不當導致樣品失效或污染,并及時更換膜和其他配件。
超濾離心管的分子量選擇:按照樣品量和目標分子量選擇適當?shù)某瑸V離心管,為了得到較高的收率,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,不超過目標分子量的一半。因為超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的超濾管多次重復加樣離心。如果同時需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì),可將待濃縮樣品稀釋到超濾管較大容積再離心,重復2次可除去99%鹽。避免過長時間或者過速離心,雖然優(yōu)良品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設(shè)計,可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過度濃縮,體積越小,越容易因表面吸附而損失得率。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時補加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。
玻璃離心管:使用玻璃管時離心力不宜過大,需要墊橡膠墊,防止管子破碎,高速離心機一般不選用玻璃管。離心管蓋子封閉性不夠好,液體就不能加滿(針對高速離心機且使用角轉(zhuǎn)子)以防外溢,失去平衡。外溢后果是污染轉(zhuǎn)子和離心腔,影響感應器正常工作。超速離心時,液體一定要加滿離心管,因為超離需要抽高真空,只有加滿才能避免離心管變形。塑料離心管:塑料離心管的優(yōu)點是透明或者是半透明的,它的硬度小,可用穿刺法取出樣本。缺點是易變形,抗有機溶劑腐蝕性差,使用壽命短。塑料的離心管又有PP(聚丙烯)、PC (聚碳酸酯),PE (聚乙烯)等材質(zhì)。PP的管子性能相對來說比較好。塑料的離心管透明或者半透明,可以直觀的看到樣品離心情況,但是比較容易變形,抗有機溶劑的腐蝕性較差,所以使用壽命較短。因此,實驗室一般會經(jīng)常購買離心管。超濾離心管通常需要在低溫條件下進行操作,以避免目標分子被破壞或失活。
脫鹽、更換緩沖液或滲濾是從含有生物分子的溶液中去除鹽分或溶劑的重要方法。鹽分去除或緩沖液更換可通過超濾管來完成,具體過程是濃縮樣本,棄去濾出液,然后向濃縮液中加入任何所需的溶劑,恢復到樣本原先的體積。"洗出"的過程可反復進行,直到雜質(zhì)的濃度被充分降低。關(guān)于超濾管的常見問題與解答:Q:超濾管的膜材質(zhì)是什么?A:超濾管的膜材質(zhì)為默克密理博特有的Ultracel再生纖維素膜,生產(chǎn)工藝嚴格,截留分子量明確而準, 蛋白吸附損失小。Q:如果要用超濾的方法分離兩種蛋白,那么這兩個蛋白的大小需要相差多少?A:按照經(jīng)驗,建議兩個蛋白的分子量要相差 一個數(shù)量級(10倍)。使用超濾離心管時,應注意控制轉(zhuǎn)速,以避免過度旋轉(zhuǎn)導致超濾膜損壞或溢出樣品。湖州離心管工廠
超濾離心管可根據(jù)不同孔徑大小選擇超濾膜,以便過濾出所需大小范圍內(nèi)的目標分子。江蘇高離心力離心管廠家電話
超濾離心管使用注意事項:(1)選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質(zhì)的耐受程度有所不同。2)新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂?shù)陌拙€為準。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。(3)平衡。質(zhì)量和重心二者都要達到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。不同離心機的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后,有所不同。離心機的加速度調(diào)至較低檔,減小對膜的壓力。注意,一定要等離心機達到目的轉(zhuǎn)速之后,方可離開離心機,否則離心機出問題時,無法一時間處理。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整(角轉(zhuǎn)離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。江蘇高離心力離心管廠家電話