我用的是3500g，4度離心，時(shí)間可以自己控制，取決于你之后的濃縮體積，我一般是200ul左右。千萬別一下離心時(shí)間太長(zhǎng)，不同的蛋白濃縮的速度不同，有的需要長(zhǎng)時(shí)間離心，有的則一下子就好。當(dāng)然也和你的蛋白是否比較純，所用的是什么buffer，還有蛋白的濃度有關(guān)系。所以離心時(shí)要先短些時(shí)間觀察一下你的濃縮速度，不要一下子濃縮過了，甚至形成沉淀就得不償失了。另外其實(shí)他們的管子都設(shè)計(jì)的是一次性使用，所以如果想重復(fù)使用，不要離得速度太高，4000－4500RPM就差不多了，另外重復(fù)使用時(shí)要看看管壁上有沒有裂紋，現(xiàn)在的管子好像不如從前的結(jié)實(shí)了。超濾離心管的選擇取決于被過濾的溶液或混合物的性質(zhì)及所需的純度和體積。青島3K超濾離心管生產(chǎn)廠

選擇合適的超濾管。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說明書，注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。新買來的超濾是干燥的，使用前加入超純水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預(yù)冷。直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機(jī)預(yù)冷至4度）。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速rpm換算成g之后，有所不同。青島超濾離心管品牌使用超濾離心管時(shí)應(yīng)注意避免過度旋轉(zhuǎn)造成樣品變性或降解，并影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

離心機(jī)的加速度調(diào)至較低檔，減小對(duì)膜的壓力。注意，一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后，方可離開離心機(jī)，否則離心機(jī)出問題時(shí)，無法一時(shí)間處理。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整（角轉(zhuǎn)離心機(jī)的情況是膜與軸垂直）。在實(shí)際使用中，一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低，這樣可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命。當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí)，取50ul緩沖溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍(lán)色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mgml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測(cè)，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。

超濾離心管，備有四種材質(zhì)的超濾膜：聚醚砜、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart，可根據(jù)不同要求靈活選用；兩種回收濃縮液的方法：既可用吸管直接吸取并回收，又可將離心管放入離心機(jī)反甩，將濃縮液甩入回收帽中，加蓋保存。這兩種方法都可使?jié)饪s液達(dá)到近乎完全回收；截留分子量普遍，配有3K、5K、10k、30K、50K、100K、300K、1000K、0.2μl的聚醚砜膜；新推出產(chǎn)品膜2K型，具有極低的蛋白吸附特性，高流速、高通量，是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜。用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時(shí)候，輕輕加入新的Buffer（經(jīng)0.22um超濾膜超濾），再 濃縮至1ml左右，連續(xù)三次，之后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達(dá)到1000倍以上，基本上可以達(dá)到換buffer的目的。超濾離心管在醫(yī)學(xué)圖像學(xué)中也具有重要意義，如MRI掃描、CT檢查等領(lǐng)域。

離心過濾器具有快速超過濾功能，能夠達(dá)到較高的濃縮系數(shù)，易于從稀釋液和復(fù)雜的樣本組合進(jìn)行濃縮液回收。其豎式設(shè)計(jì)以及可用的濾膜表面積能提供快速的樣本處理和較高的樣本回收率(通常大于90%稀薄的初始溶液)，并能進(jìn)行80倍濃縮。典型的處理時(shí)間為15至60分鐘，這取決于標(biāo)稱分子量限值(NMWL)。豎式設(shè)計(jì)將溶質(zhì)極化和之后造成的濾膜結(jié)垢降至較低，過濾裝置中的物理止濾點(diǎn)防止過濾器旋轉(zhuǎn)過度使樣本干燥和造成樣本損失。濃縮液用移液管從過濾器的樣本槽中收集，而超過濾濾出液則收集到所提供的離心管中。該裝置可在擺桶或定角轉(zhuǎn)子中旋轉(zhuǎn)。裝置未經(jīng)消毒，只供—次使用。超濾離心管還可以用于分離和提取植物中的活性成分和化合物。江蘇10K超濾離心管選擇

超濾離心管可根據(jù)不同孔徑大小選擇超濾膜，以便過濾出所需大小范圍內(nèi)的目標(biāo)分子。青島3K超濾離心管生產(chǎn)廠

質(zhì)量和重心都應(yīng)該平衡。注意速度和加速度不要太快，否則會(huì)直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心預(yù)冷至4度〉。膜和旋轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明進(jìn)行調(diào)整（對(duì)于角向離心機(jī)，膜垂直于軸〉。在實(shí)際應(yīng)用中，一般的速度開度比手動(dòng)低，可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命。4。當(dāng)濃縮到剩余的1毫升時(shí)，取中國(guó)產(chǎn)的504.1l布拉德福德溶液，加104 l流過，看是否變藍(lán)，以判斷ur管是否漏蛋白。如果管道泄漏，重新倒入上層，然后流過新管道開始超濾。為了準(zhǔn)確確定管道是否泄漏，用5 mg/ml BSA離心10分鐘，然后將其穿過，大致運(yùn)行膠水或Bradf ord，繼續(xù)添加剩余的蛋白質(zhì)溶液以濃縮（在冰上操作以防止蛋白質(zhì)加熱〉，直到所有濃縮物都添加完畢。離心過程中應(yīng)注意是否有蛋白質(zhì)沉淀，導(dǎo)致堵塞。如果發(fā)生沉淀，有必要確定沉淀的具體原因是蛋白質(zhì)濃度過高還是緩沖液不當(dāng)。青島3K超濾離心管生產(chǎn)廠

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