超濾是大分子脫鹽、濃縮較方便的方法,重復性好,得率有保障,已經在蛋白、抗體、病毒、核酸、囊泡等樣品制備中建立標準操作;在目前大熱的外泌體制備中也已經成為主流方法。超濾管采用離心方式快速處理樣品,是很多科研小伙伴們每天要用到的基本裝備。但是,在默克生命科學團隊推出超濾管中文說明書(AU0.5/4/15)之前,我們發(fā)現(xiàn)近90%的使用者在選擇和使用過程中因為缺乏必要信息而沒有獲得較佳體驗,更重要的是,寶貴的樣本會遭受本可避免的損失!如果目的蛋白是120kDa,請問應該選擇的超濾管規(guī)格是100k,50k,還是30k甚至10k?你采用的是1/2,1/3抑或1/6算法?這些沒有統(tǒng)一的說法,是因為不同廠家的膜的截留分子量的定義不同。使用超濾離心管時應注意避免過度旋轉造成樣品變性或降解,并影響后續(xù)實驗結果。溫州100K超濾離心管生產公司
以下是處理超濾管,重復利用超濾管的步驟。倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用設備頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀懸起,然后倒掉,不可用自來水猛沖】然后加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內壁再用MilliQ水洗干凈。取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml。離心管,排出部分水,然后蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項,每根管用三四年不會壞。河南3K超濾離心管超濾離心管也可用于從血漿或尿液中提取蛋白質和核酸等大分子化合物。
離心機的加速度調至較低檔,減小對膜的壓力。注意,一定要等離心機達到目的轉速之后,方可離開離心機,否則離心機出問題時,無法一時間處理。膜與轉軸的方向根據(jù)說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。當濃縮到剩下1ml時,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。
超濾作為一種膜分離技術,普遍應用于生物樣品的濃縮、脫鹽和緩沖液置換,其原理是樣本在力的作用下,通過超濾膜孔徑的篩濾,大分子量的顆粒被截留下來,而水、溶劑和低分子量溶質則允許透過膜,從而達到濃縮、脫鹽和緩沖液置換的目的,這種方法較大的特點是操作簡便、快速、高效,可同時濃縮和純化分子,一般來說超濾的回收率能夠達到90%以上,因此得到許多人的青睞。一種超濾離心管,包括主管,主管為頂部開口底部封閉結構,主管開口處安裝有頂蓋,主管內安裝有內管,內管上下貫通,內管底面貼合有超濾膜,超濾膜將內管底面包覆,超濾膜底面貼合有支撐板,超濾膜位于內管底面與支撐板之間,內管底部安裝有底托,內管配合底托將超濾膜、支撐板壓緊,內管、超濾膜、支撐板、底托與主管中位于底托以下的容腔空間連通。離心機轉速會影響到超濾效果,因此需要根據(jù)實驗要求調整相應的轉速。
根據(jù)其大小,又分為1.5ml、2ml、5ml、10ml、15ml、50ml等,國產的離心管一般就是這幾個規(guī)格,用的較多的也就是10ml和50ml的。如果您的離心機是配30ml或者其他規(guī)格的離心管時,就要考慮進口的了。另外,離心管還有圓底和尖底,以及螺旋蓋和插蓋之分。螺旋蓋的離心管帶有較精細的刻度,插蓋的只有一個總體的容量標示。實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用的較多,因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機上。塑料的離心管又有PP(聚丙烯)、PC(聚碳酸酯),PE(聚乙烯)等材質。PP的管子性能相對來說比較好。塑料的離心管透明或者半透明,可以直觀的看到樣品離心情況,但是比較容易變形,抗有機溶劑的腐蝕性較差,所以使用壽命較短。因此,實驗室一般會經常購買離心管。下面就對各種材質分別介紹一下。根據(jù)其材質的不同總體可以分為塑料和玻璃的,塑料的離心管用的較多,又可以分為PP、PC、PS等,根據(jù)不同需要,生產廠家會選擇不同的塑料材料來進行制作。超濾離心管可以用于分離各種細胞類型,并進行進一步的培養(yǎng)、檢測和研究。安徽再生纖維素離心管哪家強
超濾離心管還可以用于分離和提取植物中的活性成分和化合物。溫州100K超濾離心管生產公司
一提起蛋白質濃縮、更換緩沖液,我們都會想起超濾。這是一種我們都很熟悉的膜分離技術。它可用來分離溶液中極小的顆粒和溶解的分子。這種方法的較大特點是操作簡便,只需要濃縮離心管和離心機,即可圓滿完成我們的任務。與層析、透析等方法相比,超濾對被處理的分子更加溫和。它不需要有機萃取,就不會導致蛋白變性。這種方法非常高效,可同時濃縮和純化分子。操作可在低溫(比如冷庫)下進行。另外,快速、便宜,也是許多人青睞它的原因。濃縮離心管的操作很簡單。選擇適當?shù)臐饪s離心管,加入待處理的樣本,按照離心管的指示進行離心操作,之后回收截留的樣本。在離心力的作用下,溶液中的小分子溶質和溶劑透過超濾膜,被收集在濾過液收集瓶中,而大分子溶質被超濾膜截留在濃縮離心管中。這種分離的主要依據(jù)是分子大小,但分子形狀和電荷等其他因素也會有影響。溫州100K超濾離心管生產公司